壮瑶药协同创新中心、广西壮瑶药重点实验室

地钱(Marchantia polymorpha L.)是地钱科( Marchantiaceae) 地钱属( Marchantia L.)植物，为叶状体苔类，广泛分布于世界各地[1]。地钱又名地衣，药用始载于《名医别录》,《本草纲目》中谓之“石衣”, 味淡, 性凉，归肝经。具有清热利湿、解毒敛疮功效，主治湿热黄疸、疮痈肿毒、毒蛇咬伤、水火烫伤、刀伤、骨折等[2]。我国除地钱属植物除有地钱分布外，还有拳卷地钱(Marchantia convoluta gao et chang)、粗 裂 地 钱 (Marchantia paleacea Bertol.) 和风兜地钱(Marchantia paleacea Bertol. subsp. diptera(Nees et Mont) Inous)[3-5]等。 课题组前期资源调查表明广西境内存在地钱、拳卷地钱、粗裂地钱3种地钱属植物[6]。

扫描电子显微镜（scanning electron microscope，简称SEM）可以直接观察自然状态的样品，视场大，景深长，样品制备简单，分辨率高，图像富有立体感，特别有利于观察各种样品的表面形貌。目前SEM技术已经广泛应用于药用植物花粉[7-9]、叶片[10-11]、种子 [12]以及矿物药[13-14]的鉴别上。为了准确地对三种地钱进行鉴别，现运用SEM技术对样品叶状体表面进行扫描观察、鉴别。
 

1 仪器与试剂

1.1仪器仪器：电子显微镜(日立H-500);临界点干燥器(日立HCP-2)；离子溅射仪（日立IB-5）

1.2药材与试剂

实验材料：

地钱Marchantia polymorpha L.（广西南宁高峰林场）

拳卷地钱Marchantia convoluta Gao et Chang.（广西靖西县）

粗裂地钱Marchantia paleacea Bertol.（广西上林县）

以上材料均由广西中医药大学药用植物教研室韦松基教授鉴定。

试剂: 蛋白水解酶（上海仪森生物有限公司提供，纯度≥98%）；多聚甲醛、戊二醛、乙醇(均为AR，广东汕头西陇化工股份有限公司)。

2 方法

用蛋白水解酶清除叶状体表面覆盖的大量黏液和杂质的组织后，用蒸馏水漂洗干净。用4%多聚甲醛与5%戊二醛的混合液固定细胞形态2h。依次用50%、60%、70%、80%、95%乙醇浸泡样品以脱去样品细胞内的水分，用临界点干燥法干燥样品，然后迅速粘贴在样品台上，用离子溅射仪喷镀铂金膜，厚度 10 nm。在电子扫描显微镜下观察样品表明形态并拍照。

3 结果

地钱的细胞的网格比较明显,略呈条纹状，气孔数较少，表皮细胞密布 ,波状纹理,气孔类固定式椭圆形,组成气孔的细胞不向气孔腔集中; 拳卷地钱细胞的网格不明显,略呈明显的条纹状, 气孔数较多，表皮细胞无明显的纹路,颗粒状附属物多见,气孔类固定式,常见气孔内部5个细胞向气孔腔中部集中成结构; 粗裂地钱细胞的网格不明显,表皮有较多的附属物, 表皮细胞略呈纹理结构,网格间距较大,气孔类固定式,常见气孔内部4个细胞。

     广西产地钱(地钱,拳卷地钱,粗裂地钱)叶状体分别采用扫描电镜100倍(如图a,b, c所示)和1000倍(图d,e,f所示)观察,特征可以明显，本方法可以有效而准确地鉴别出广西产的三种地钱。

4小结

扫描电镜是鉴定生药原植物、叶类生药、果实和种子类生药以及矿物类和动物类生药的有力工具之一。然而，生物体由于生存环境不同、遗传物质差异，     其形态特征也可能发生变化。因此,在利用扫描电镜进行生药鉴定时,有必要对不同发育程度和不同产地的样本进行比较研究,以保证结果的可靠性。

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