壮药粪箕笃的显微鉴别研究

戴忠华^1,2，韦威²，樊柳园²

（1.成都中医药大学，成都 610072；2.广西中医药大学，南宁 530200）
 
摘 要：目的 对壮药粪箕笃进行横切及粉末显微鉴别研究。方法 ①利用石蜡切片法，在显微镜下观察、描述粪箕笃组织显微结构特征；②制作粉末临时片，在显微镜下观察、描述粪箕笃粉末显微特征。结果 ①粪箕笃茎横切面观波浪状，中柱鞘与维管束间有大量薄壁细胞；②粪箕笃叶横切面下表皮细胞常形成乳头状突起；栅栏组织3列，不通过中脉；③粪箕笃粉末显微特征：木薄壁细胞壁呈连珠状加厚，木栓层细胞壁显著加厚、石细胞化。
关键词：壮药；粪箕笃；横切；粉末；显微鉴定
 
Microscopic Identification of Stephaniae Longae Herba of Zhuang Medicine
DAI Zhonghua^1,2，WEI Wei²，FAN Liuyuan²
(1. Chengdu University of TCM，Chengdu 611137；2. Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200）
 
Abstract: Objective To study the microscopic identification of transection and powder microscopy of of Stephaniae Longae Herba. Method ① The microscopic structure of transection of Stephaniae Longae Herba was described under the microscope through paraffin method. ②The microscopic characteristics of powder of Stephaniae Longae Herba was described under the microscope through powder production method. Result ① The cross section of Stephaniae Longae Herba like the waves. There are a large number of parenchyma cells between the mesosheath and vascular bundles. ② The epidermal cells of the transection of leaf of Stephaniae Longae Herba are formed like papilla. The palisade is composed of three column cells, not through the middle. ③The microscopic characteristics of powder of Stephaniae Longae Herba: The cell wall of the xylem parenchyma has a continuous bead thickness. The cell wall of the cork layer was significantly thickened, it looks like stone cells.
Keywords: Zhuang Medicine；Stephaniae Longae Herba；transection；powder；Microscopic identification
 
壮医是壮族人民在长期的生产、生活实践中同疾病作斗争的经验总结，有着独特的理论和丰富的内容，具有鲜明的地域性、民族性、传统性。壮药是指在壮医药理论指导下的用于临床防治疾病和保健作用的药物^[1-4]。壮药的一大特点是善于解毒，而且解毒的范围广，包括解蛇毒、虫毒、食物中毒、药物中毒、箭毒、蛊毒等。粪箕笃（Gaeuvad/勾弯）为防己科植物粪箕笃Stephania longa Lour.的全草；味苦、性寒，清热解毒、利湿消肿、祛风活络，主治热病发狂、泻痢、黄疸、小便淋涩、水肿、喉痹、疮痈肿毒、风湿痹痛、毒蛇咬伤等^[5]；壮医功效：清热毒、祛风毒、调龙路火路、通谷道，主治能蚌（黄疸）、阿意咪（痢疾）、阿意囊（便秘）、呗农（痈疮）、额哈（毒蛇咬伤）等^[6]。本文对常用壮药粪箕笃的组织结构、粉末特征进行显微鉴定研究，为壮药粪箕笃的准确、快速地鉴定提供参考。
1 实验材料与仪器、试剂
1.1 实验材料
粪箕笃采自广西壮族自治区南宁市伊岭岩，经广西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定为防己科植物粪箕笃Stephania longa Lour.的全草。
1.2实验仪器与试剂
HM355S型石蜡切片机（徕卡仪器有限公司、德国）；OLYMPUS  BTH型光学显微镜（奥林巴斯株式会社、日本）；Nikon Eclipse 80i型光学显微镜（尼康公司、日本）；尼康 D-700照相机（尼康公司、日本）
FAA固定液（70%乙醇：冰醋酸：福尔马林=18:1:1），二甲苯，TO型生物透明剂，中性树脂，番红，亮绿，水合氯醛溶液，稀甘油溶液，蒸馏水等。
2 实验方法
2.1 粪箕笃组织切片----石蜡切片法
石蜡切片法的一般流程为：取材→固定→水冲洗→脱水→透明→上蜡→包埋→切片机切片→粘片→脱蜡→染色→封藏→贴标签^[7,8]。
详细步骤如下：
（1）组织固定： 用刀片切取新粪箕笃组织，茎切取长度为2cm左右，叶围绕主脉切取1cm²左右的方形叶面积，放入细口瓶中，用FAA固定液固定，48h以上，备用。
（2）取材与水冲洗： 用手术刀从FAA固定液固定的粪箕笃材料切取2mm左右的长度，连同编号（用铅笔或黑色签字笔写，防止被水化及上蜡时的蜡溶化字迹）一起包于砂纸中，折叠好后用长针灸针穿一起浸泡在大烧杯中，用小水冲4h左右，取出后用吸水纸吸干（要轻柔，尽可能干）。
（3）组织脱水： ①将经过水冲洗吸干后的粪箕笃组织先放于75%的乙醇溶液中脱水1h，②再放于85%的乙醇溶液中脱水1.5h，③再放于90%的乙醇溶液中脱水2h，④再放于95%的乙醇溶液中脱水12h左右，⑤再放于无乙醇溶液Ⅰ号瓶中脱水30min，⑥最后放于无乙醇溶液Ⅱ号瓶中脱水1h；取出后用吸水纸吸干。
（4）组织透明： ①将经过脱水的吸干的粪箕笃组织放入生物透明剂Ⅰ号瓶中30min，②再放入生物透明剂Ⅱ号瓶中1h ，③再放入生物透明剂Ⅲ号瓶中1h；④取出后用吸水纸吸干。
（5）组织上蜡： ①在恒温箱中（60℃左右）将经过透明的粪箕笃组织放入装有液化的石蜡的Ⅰ号瓶中30min，②再放入液化的石蜡的Ⅱ号瓶中1h ，③再放入液化的石蜡的Ⅲ号瓶中2h。
（6）石蜡包埋（整个过程要快，以防液化石蜡凝固）：先用两块能组织的梯形模具组合成一方形，倒上液化石蜡后，迅速取出上过蜡的组织，用镊子轻轻的夹（防破坏组织），使粪箕笃组织的横切面向下，竖直的立于液化石蜡中，在蜡块上放上标签，等凝固后即可。
（7）切片与制片： 在切片前先将蜡块在冰箱中冷藏（冻后的蜡块在切片时，各切片易分开，不粘片），用石蜡切片机切成6～10µm左右的薄片，将切片先平铺于温水面（40℃左右，各切片容易成单片），再用载玻片慢慢蘸取，带蜡的切片很容易就粘在载玻片上，再将载玻片放于载玻片架上，备用。
（8）脱蜡： ①将制好的石蜡切片放于烘板上（80℃左右），使石蜡慢慢融化，到石蜡在载玻片上不明显，②将载玻片放入二甲苯Ⅰ号瓶中5min，③再放入二甲苯Ⅱ号瓶中5min，④再放入二甲苯Ⅲ号瓶中5min；
（9）水化： ①将以脱蜡的载玻片放于95%的乙醇溶液中5min，②再放入85%的乙醇溶液中5min，③再放入75%的乙醇溶液中5min，④最后透水，放于水中 5～10min。
（10）染色： 用改良的番红、亮绿对染法：①先滴2滴番红于载玻片的组织上；②15 min后，95%的乙醇溶液洗去番红；再滴2滴亮绿于载玻片的组织上；③5min后，95%的乙醇溶液洗去亮绿；④接着脱色，在无水乙醇溶液Ⅰ、Ⅱ号瓶中连续浸泡、提起几次，洗去多余的染料；⑤最后连续浸泡二甲苯Ⅰ、Ⅱ号瓶中几次，进行载玻片的透明；⑥最后将载玻片平放于托盘中。
（11）制作永久切片： 用中性树脂封片：①滴1～2滴中性树脂于经过染色的组织上；②用盖玻片慢慢盖与载玻片上的中性树脂部位，使中性树脂均匀分开，且要尽量无气泡；③制作永久切片。
（12）显微观察与拍照： 将制作好永久切片在光学显微镜下观察组织显微特征，并用数码相机拍照、保存。
2.2 粪箕笃粉末片
（1）粪箕笃粉末的制备  取实验用粪箕笃饮片，经烘箱烘干后，粉碎（用铜摏捣碎）并过60目筛，装于磨口瓶中，备用。
（2）粉末制片为临时片，①用稀甘油制片，可用于观察淀粉粒等粉末特征；②用水合氯醛溶液制片，透化后，使纤维、导管等特征更明显。
（3）粉末特征的观察与拍照  将制作好的粪箕笃粉末切片在光学显微镜下观察组织显微特征，并用尼康80i显微镜拍照，校正后标注导管的直径、纤维的长度、石细胞的胞径、草酸钙晶体的直径等，保存。
3 结果
3.1 粪箕笃茎横切
①茎横切面观为波浪状。②木栓细胞2～4列；内有皮层，2～4列细胞，石细胞散在。③中柱鞘由4～5列纤维细胞组成，呈波浪形；中柱鞘与维管束间有大量薄壁细胞，连一起犹如8个花瓣；在中柱鞘与维管束交界处具多数石细胞。④维管束为双韧型；外韧皮部与木质部间具束中形成层，内韧皮部与木质部间无束中形成层；木质部具大型导管。⑤中央为髓部，髓射线为4～6列细胞。（详见图1）
 
 
3.2 粪箕笃叶横切
①上表皮细胞大，长方形或方形；下表皮细胞长圆形，常形成乳头状突起。②栅栏组织3列，不通过中脉，外2列细胞长圆柱形，内列细胞短圆柱形；海绵组织细胞圆形，排列松散。③中脉维管束外韧型，具束中形成层。④在中脉上、下表皮内侧具有多列厚角组织，石细胞大量散在。（详见图2）
 
3.3 粪箕笃粉末特征
粉末灰绿色。①木栓层细胞多角形，壁显著加厚，石细胞化，纹孔对明显。②木薄壁细胞壁加厚，有时呈连珠状加厚。③韧皮纤维常成束，壁厚，胞腔线形或不明显，直径15～44μm；木纤维壁厚，纹孔沟显著，胞腔大，直径20～55μm，长80～180μm；。④石细胞肾形或不规则形，直径35～70μm。⑤导管主要为螺纹导管、梯纹导管，可见有环纹导管，直径20～60μm。（详见图3）
 
 
参考文献
[1] 朱华,田慧,蔡毅.壮药学[M].南宁:广西民族出版社,2015:34-36.
[2] 朱华.中国壮药志[M].南宁:广西民族出版社,2003:233
[3] 朱华,韦松基.常用壮药生药学质量标准研究[M].南宁:广西民族出版社,2003:180.
[4] 朱华,韦松基.壮药药材学[M].南宁:广西民族出版社,2006:87-88.
[5] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草（3）[M].上海:上海科学技术出版社,1999,382（总1981）
[6] 广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准（第二卷） [S].南宁:广西科学技术出版社,2011:290
[7] 朱华,傅鹏主编. 壮药材锡叶藤、兰香草、大叶金花草、耳草的研究[M].南宁：广西科技出版社,2016:56-60.
[8] 朱华,傅鹏,苏健主编. 壮药材石仙桃、昂天莲的研究[M].南宁：广西科技出版社,2017:70-71.