壮药小黄草生药学鉴别研究

  陈龙，韦安达，戴忠华，樊柳园

（广西中医药大学，南宁 530200）
摘  要: 目的 壮药小黄草生药学鉴别研究。方法 原植物鉴别、性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别四大鉴别法。 结果 多年附生草本，茎圆柱形，叶纸质，无柄，萼囊短、钝，花瓣椭圆形；茎横切面类圆形，表皮细胞较小，类长方形，排列紧密，外被金黄色角质层；以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（8∶3∶4d）为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，供试品与对照药材显相同颜色的斑点。结论 以上特征明显、稳定，可作为壮药小黄草生药学鉴别依据。
关键词：小黄草；生药学；鉴别
 
小黄草^[1]，为兰科植物美花石斛 Dendrobium loddigesii Rolfe. 的干燥茎，又名粉花石斛、环草石斛，附生于树上或林下岩石上，主产于广东、广西、贵州、云南等地。
小黄草是广西常见的石斛品种，数量较多，是石斛药材来源的重要品种之一，载于各版药典，是环草石斛、小黄草等石斛药材的重要来源，也是我国香港及东南亚石斛市场的主流品种之一。
1 本草考证
《神农本草经》^[2]中首次记载了“石斛”一名，即“石斛、味甘平。主伤中除痹下气。补五藏虚劳羸瘦。强阴。久服厚肠胃。轻身延年。一名林兰。”南北朝·梁《本草经集注》^[3]记载：“一名林兰，一名禁生，一名杜兰，一名石蓫。生六安山谷水旁石上。”《名医别录》（据《本草纲目》转引）^[4]也记载称：“今用石斛出始兴。生石上，细实。以桑灰汤沃之，色如金，形如蚱蜢髀者佳，……，其生栎木上者名木斛，其茎至虚，长大而色浅，不入丸药，惟可酒渍煮（汤）用。俗方最以补虚，疗脚膝。”唐《新修本草》^[5,6]除原有研究基础之外又增加了一些新的内容：“始安亦产”、“今荆襄及江左又有两种，一者似大麦，累累相连，头生一叶……（麦斛）；一种大如雀髀，名雀髀斛，……亦如麦斛，叶在茎端。其余斛如竹，节间生叶也。”明李时珍的《本草纲目》^[6]中也有对石斛的描述，“石斛名义未详。其茎状如金钗之股，故古有金钗石斛之称。”清代亦有多部本草记载了石斛相关内容。赵学敏《本草纲目拾遗》，吴其濬《植物名实图考》中记载了有关石斛品种及性状的描述^[6]，如霍山石斛。新中国成立以来，也有多部本草书籍记载“石斛”描述和资料。
2 生药学鉴别
小黄草药材分别采于广西区内不同月份、不同产地，共11个批次，经鉴定为兰科植物美花石斛 Dendrobium loddigesii Rolfe. 的干燥茎。完成样品收集后，将所有11份样品进行粉碎处理，并统一过20目筛，备用。
样品采集详细信息见表3-1。
表3-1 小黄草样品信息

编号	采集时间	产地/采集地点/批号	药用部位	样品状态
XHC-1	2014.05	来宾市金秀县	茎	药材
XHC-2	2014.09	百色	茎	药材
XHC-3	2014.10	河池市大化县沿滩镇	茎	药材
XHC-4	2014.11	宜州市叶茂村	茎	药材
XHC-5	2015.05	河池市	茎	药材
XHC-6	2015.06	百色市靖西县	茎	药材
XHC-7	2015.07	崇左市龙州县	茎	药材
XHC-8	2015.07	云南	茎	药材
XHC-9	2015.07	河池市	茎	药材
XHC-10	2015.08	云南	茎	药材
XHC-11	2015.09	崇左市龙州县	茎	药材

    
2.1 原植物鉴别  多年附生草本。茎圆柱形，高10~45cm，直径2~7mm，基部略细。叶纸质，长圆柱披针形或舌形，长4~6cm，宽1.2~1.8cm，先端锐尖而略钩转；无柄；叶稍松抱于茎，鞘口张开。花单生，淡玫瑰色；苞片小；中萼片卵状长圆形，长1.7~1.9cm，宽约6mm，先端钝，侧萼片比中萼片长，但较窄，先端锐尖；萼囊短、钝；花瓣椭圆形，较宽，等长于中萼片，先端钝，边缘多少有齿；唇瓣近圆形，唇盘凹陷，被短柔毛，3条线纹从基部直达先端，边缘流苏状；合蕊柱短。花期4~5月。见图3-1。

 
图3-1 小黄草原植物图
 
2.2 性状鉴别^[7,8]  鲜药材为黄绿色。药材茎细长圆柱形，常弯曲，长11~40cm，直径1~3mm，节间长0.4~2.3cm。表面金黄色，有光泽，具细纵纹。质柔韧而实，断面较平坦。气无，味较苫，有粘性。见图3-2.。

 
图3-2 小黄草干药材图
2.3 显微鉴别：
2.3.1 茎横切面特征  表皮细胞1列，扁平，外被鲜黄色角质层；皮下层细胞1~2列，壁薄，角隅微木化；基本组织细胞大小相近或差异，散在多数外韧型维管束，略排成4~6圈；维管束外侧纤维束新月形或半圆形，其外侧薄壁细胞有的含类圆形硅质块；有的薄壁细胞中含草酸钙针晶。见图3-3。

 
图3-3小黄草茎横切面特征图
1.表皮细胞  2.薄壁细胞  3.韧皮部  4.木质部
2.3.2 粉末特征  粉末黄棕色。纤维多成束或散在，微木化，维管束上镶嵌硅质块细胞，排列成纵行；草酸钙针晶存在于薄壁细胞中，或散在；木纤维长梭形，多成束，纹孔较多；导管为螺纹导管；淀粉粒较多，散在或成团存在于薄壁细胞中；薄壁细胞椭圆形或类圆形，具纹孔；棕色块散在。见图3-4。


 

 
图3-4 小黄草粉末特征图
1表皮细胞（1a侧面观，1b表面观） 2纤维  3棕色块
4草酸钙针晶  5淀粉粒  6硅质块  7导管  8薄壁细胞
2.4 薄层鉴别
2.4.1 提取溶剂的考察：选取水、乙酸乙酯、甲醇、50%乙醇、95%乙醇等五种不同极性的溶剂进行考察，其中以甲醇提取液斑点清晰圆润。故采用甲醇作为提取溶剂。
2.4.2 提取方法的摸索：以甲醇为提取溶剂，先后、冷浸、回流的方法进行考察，通过比较发现，三种提取方法的薄层色谱图基本一致。但超声提取方法可检视斑点更清晰，干扰较少，且从操作简易，节省时间考虑，本实验采用超声提取30min的方法。    
2.4.3 点样量的考察：将制好的供试品溶液先后点样2.5μl、5μl、7.5μl、10μl于同一薄层板，结果以点样量为5μl时，主斑点较圆润且明显，故供试品药材提取溶液点取样量均采用5μl。  
2.4.4 展开系统的考察：先后采用石油醚-丙酮-冰醋酸（8∶5:4d）、石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（8∶3∶4d）等展开系统对小黄草的甲醇提取液进行考察，通过比较发现，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（8∶3∶4d）为展开剂,展开效果较好，斑点集中，Rf值适中。
2.4.5 显色剂的考察：先后采用1%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液、10%磷钼酸乙醇溶液等显色剂进行考察，通过比较发现，以10%硫酸乙醇溶液显色时，四个粉色斑点清晰，且较稳定。   
通过对选定的薄层条件反复试验，其结果稳定、可靠。不同批次小黄草薄层色谱鉴别图见图3-5。

 
图3-5 小黄草样品TLC图
1.XHC-1（对照药材）  2.XHC-2  3.XHC-3  4.XHC-4  5.XHC-5  6.XHC-6  7.XHC-7  8.XHC-8  9.XHC-9  10.XHC-10  11.XHC-11   12.XHC-12   13.XHC-1（对照药材）
色谱条件: 硅胶G薄层预制板
规格:10 cm×20 cm
          点样量:5μl；温度:15 ℃；相对湿度:60 RH%
          展开剂:石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（8∶3∶4d）
          显色剂:10%硫酸乙醇溶液
3 限量检查
3.1 水分  按照2015年版《中国药典》（四部）0832项下说水分测定法测定，结果详见表3-2。
表3-2 小黄草样品水分测定结果（n=3）

编号	水分（%）	平均含量（%）	RSD（%）
XHC-1	10.64	10.61	0.35
	10.63
	10.57
XHC-2	10.30	10.25	0.44
	10.22
	10.23
XHC-3	9.92	9.92	0.09
	9.93
	9.92
XHC-4	10.2	10.23	0.32
	10.27
	10.23
XHC-5	9.02	8.97	0.45
	8.94
	8.96
XHC-6	6.86	6.87	0.14
	6.88
	6.86
XHC-7	6.89	6.71	4.74
	6.34
	6.89
XHC-8	8.26	8.30	0.46
	8.34
	8.31
XHC-9	8.33	8.22	1.39
	8.22
	8.10
XHC-10	7.17	7.19	0.29
	7.19
	7.20
XHC-11	13.24	13.26	0.46
	13.22
	13.33

    
    数据结果表明，11批样品的水分含量在6.71%～13.26%之间，符合药典中规定的药材水分含量。
3.2 总灰分  按2015年版《中国药典》（四部）2302项下总灰分测定法测定，结果详见表3-3。
表3-3 小黄草样品总灰分测定结果（n=3）

编号	总灰分（%）	平均含量（%）	RSD（%）
XHC-1	4.07	4.13	1.49
	4.20
	4.14
XHC-2	5.31	5.26	0.87
	5.27
	5.22
XHC-3	5.31	5.26	0.87
	5.27
	5.22
XHC-4	4.01	4.00	0.66
	3.97
	4.02
XHC-5	3.74	3.73	1.06
	3.76
	3.69
XHC-6	4.86	4.77	2.35
	4.80
	4.64
XHC-7	6.74	6.59	1.94
	6.53
	6.51
XHC-8	4.52	4.67	2.97
	4.68
	4.80
XHC-9	4.69	4.72	0.51
	4.74
	4.73
XHC-10	6.66	6.76	2.15
	6.93
	6.70
XHC-11	7.18	7.19	0.98
	7.12
	7.26

    
    数据结果表明，11批药材的总灰分含量为3.73%～7.19%，最高含量上浮不超过20%，则小黄草药材总灰分含量不得超过8.0%
3.3 酸不溶性灰分  按2015年版《中国药典》（四部）2302项下酸不溶性灰分测定法，结果详见表3-4。
表3-4 小黄草样品酸不溶性灰分测定结果（n=3）

编号	酸不溶性灰分（%)	平均含量(%)	RSD(%)
XHC-1	0.42	0.42	0.46
	0.41
	0.42
XHC-2	0.8	0.81	0.85
	0.81
	0.82
XHC-3	0.30	0.31	3.20
	0.31
	0.32
XHC-4	0.43	0.43	1.56
	0.43
	0.42
XHC-5	0.29	0.29	1.93
	0.29
	0.30
XHC-6	0.66	0.66	1.04
	0.67
	0.66
XHC-7	0.47	0.46	1.49
	0.46
	0.46
XHC-8	0.35	0.36	1.35
	0.36
	0.36
XHC-9	0.37	0.37	1.95
	0.38
	0.37
XHC-10	0.85	0.84	0.40
	0.84
	0.84
XHC-11	0.83	0.81	0.85
	0.81
	0.80

    
数据结果表明，11批药材的酸不溶灰分含量在0.29%～0.84%之间，最高含量上浮不超过20%，则小黄草药材酸不溶灰分不得超过1.0%。
3.4 浸出物浸出物  按照2015年版《中国药典》2201项下水溶性浸出物测定法、醇溶性浸出物测定法进行测定，通过实验可知，小黄草浸出物热浸法含量高于冷浸法，故采用热浸法。醇溶性浸出物高于水溶性浸出物，且30%乙醇的浸出物最高，故采用30%乙醇为提取溶剂。
照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（《中国药典》2015年版四部2201项下）测定，用30%乙醇作溶剂，不同批次小黄草药材浸出物测定结果详见表3-5。
表3-5 小黄草样品浸出物测定结果（n=3）

编号	浸出物（%）	平均含量(%)	RSD(%)
XHC-1	12.67	12.73	2.14
	13.02
	12.49
XHC-2	9.59	9.64	1.43
	9.53
	9.80
XHC-3	8.92	9.03	2.87
	8.85
	9.33
XHC-4	12.36	12.18	2.72
	11.80
	12.38
XHC-5	10.06	10.33	2.36
	10.54
	10.37
XHC-6	6.79	6.71	1.25
	6.62
	6.73
XHC-7	7.56	7.54	0.84
	7.59
	7.47
XHC-8	11.01	11.18	1.30
	11.29
	11.23
XHC-9	5.80	5.64	2.88
	5.64
	5.47
XHC-10	12.68	12.65	1.45
	12.81
	12.45
XHC-11	12.62	12.54	0.60
	12.47
	12.53

    
数据结果表明，小黄草30%乙醇浸出物的含量为5.64%～12.73%，最低含量下调不超过20%，小黄草醇浸出物含量不得低于5.0%。
4 结论
对小黄草的生药学研究结果表明，小黄草为多年附生草本，茎圆柱形，叶纸质，无柄，萼囊短、钝，花瓣椭圆形；茎横切面类圆形，表皮细胞较小，类长方形，排列紧密，外被金黄色角质层；以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（8∶3∶4d）为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，供试品与对照药材显相同颜色的斑点。以上特征可作为蝴蝶花的生药学鉴别依据。
 
参考文献
[1] 朱华,韦松基主编. 常用壮药生药学质量标准研究[M].南宁：广西民族出版社,2003.78.
[2]（魏）吴普等述.（清）孙星衍、孙冯翼辑.神农本草经三卷[DB].中华古籍数据库珍藏
[3]南北朝·梁 陶弘景.本草经集注[M].人民卫生出版社.北京.1994:208.
[4]武孔媛.环草石斛药材质量分析及评价方法的研究[D].北京：北京中医药大学，2008
[5]唐·苏敬，等.新修本草卷第六.草部上品之上.上海：上海卫生出版社，1957,162.
[6]滕建北,万德光,王孝勋.石斛名实及功效的本草考证[J].中药材,2013,11:1876-1880.
[7]朱华,傅鹏主编. 壮药材锡叶藤、兰香草、大叶金花草、耳草的研究[M].南宁：广西科技出版社,2016.156.
[8]朱华,傅鹏,苏健主编. 壮药材石仙桃、昂天莲的研究[M].南宁：广西科技出版社,2017.169.