一、准备

1.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相(应足够;流动相必须用0.45 μm滤膜过滤)、样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制)，更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。

1.2通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

二、开机和泵操作

2.1开机

2.1.1接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

2.1.2打开Millennium32软件，按【Log in】，输入用户名和密码，按【OK】注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击【Run Samples】图标，选择色谱系统"600-2487”后打开Quick Set窗口。

2.2更换溶刘

2.2.1打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄〔以下简称手柄)至RUN位置;

2.2.2将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阔(断开柱和进样器);

2.2.3按【Direct】键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min(梯度配比阀在0ml/min时不工作);

2.2.4选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100% ,其它为0%;

2.2.5将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中;

2.2.6逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2m1溶剂;

2.2.7再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来井无气泡为止;

2.2.8转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂;

2.2.9重复2.2.4-2.2.8直至所有即将使用的溶剂更换完毕。

2.3排气泡

2.3.1打开参照阀，换流动相为100 %超纯水，设流速为l0ml/min(注意:确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱);

2.3.2转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约l0ml水;

2.3.3顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出(注意不要将气泡注入泵中);

2.3.4按【Stop flow】屏幕键停泵，关上参照阀;

2.3.5如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为l0ml/min，冲洗2-5min(或更长时间)后停泵，重新接上柱。

三、平衡系统(分两种情况进行)

 3.1等度模式

 3.1.1每次以0.1ml/min的增量加大流速至lml/min，以超纯水冲洗系统l0min;

 3.1.2检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。

 3.1.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的5-10%以内，如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复2.3下的步骤;

 3.1.4压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少5-6倍柱体积的流动相通过系统;

 3.1.5在Quick Set窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按【Monitor】(此后泵由软件控制)，观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移10-3Au/min,噪声为10-4Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样;

 3.1.6按【Abort】图标(左上第五个)，停止监视基线。

 3.2梯度模式

 3.2.1按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡;

 3.2.2在进样前运行1-2次空白梯度。

四、进样

 4.1在Quick Set窗口内左下部选( Single）标签，在Sample Name档内填写试样名称;在Function档内选择试样类型(标准选"Inject Standards";样品选"Inject Samples" );在Method Set档内选择所需的方法组;在Injection Volume档内输入进样体积;在Run Time档内输入记录时间。

 4.2用针头滤器过滤试样溶液(注射液可不必过滤)，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

 4.2.1如按部分装液法，用微量注射器定容进样时，进样量应不大于定量环体积的50% ,并要求每次进样体积准确、相同;

 4.2.2如按完全装液法，用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的3倍(5-10倍准确性更佳);

 4.3按【Single】标签内右边的进样(Inject)按钮，等待窗口底部状态档内显示“Waiting"后，方可进样。

 4.4将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，除另有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集数据并记录图谱。

 4.5让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前1-2min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出。

 4.6先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。

五、数据处理(外标法)和打印

 5.1右击系统主界面下的【Browse Project】图标，选择相应的项目，按【OK】进入Project窗口，选【Channels】标签。

 5.2建立处理方法选择一个待积分的标准，右击后选"Review”进入Review窗口。按【 Processing Method Wizard】图标(左边第一个)进入New Processing Method向导窗口，按【OK】。

 5.2.1划入一个感兴趣的最窄的峰，按【Next&gt】;

 5.2.2划入一段包含噪声的基线，按【Next&gt】;

 5.2.3划入一段要积分的区间，按【Next&gt】;

 5.2.4根据情祝选择最小峰面积和最小峰高，按【Next& gt】、【Next&gt】;

 5.2.5在Name档内输人各组分峰的名称，按【Next&gt】、【 Next&gt】;

 5.2.6在Method Name档内填写方法名称，按【Finish】。退出Review窗口。

 5.3修改标准选中所有标准，右击后选"Alter Sample”进入Alter Sample窗口。‘      5.3.1在Sample Type档内将Unknown改成Standard;

 5.3.2按【Amount】图标(左上第六个)进入Component Editor窗口;

 5.3.3按【Copy from Process Method】图标(左上第五个)，选择刚建立的处理方法，按【Open】，在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按【OK】回到Alter Sample窗口;

 5.3.4按【Save】图标存盘，退出Alter Sample窗口;

 5.4积分先选中所有标准，再选中所有未知样品，右击后选"Process'，进人Background Processing samp; Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按【OK】。

 5.5打印在Project窗口下选【Results】标签。

 5.5.1选中要打印的标准样品，右击后选“Preview'”，进人Open Report Method窗口，选合适的打印方法，按【OK】进人Report Publisher (Preview)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标(左上第二个)即可打印结果;

 5.5.2按【Close】可进入Report Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按【Print】图标(右数第二个）即可打印结果;

 5.6数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按【Log out】退出系统，关闭Millennium32软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。

六、清洗系统和关机

 6.1数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗l0min后，换水冲洗。

 6.2清洗进样阀。

 6.2.1用启动注射器吸l0ml超纯水;

 6.2.2将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上(不要针)，并将它们一起接到进样口上;

 6.2.3.使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推人，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。

 6.3清洗柱

 6.3.1 C18柱先用超纯水以lml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min;

 6.3.2 ProteinPAK60柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min;

 6.4用水冲洗柱后，分别用20m1超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔.

 6.5 清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、脱气机、断电保护器，断开电源。

    6.6填写使用记录