组织学与胚胎学教研室

课程名称

组织学与胚胎学

适用专业

中医桂派杏林班、中医定向、中医养生、中医儿科、中医康复、中医骨伤、针推、壮医、护理专业

实验项目名称

显微镜使用、疏松结缔组织铺片的制作与肥大细胞染色

分组情况

20人/组

实验目的

1．熟悉普通光学显微镜的构造。

2．掌握光学显微镜的使用方法。

3．熟悉观察标本的注意事项。

4．了解显微镜的基本维护方法。

1. 了解组织学石蜡切片标本的制备过程。

6.通过该实验掌握疏松结缔组织的光镜结构；

7.通过细胞结构特点加深对肥大细胞功能的理解；

8.学会制作铺片，学会肥大细胞染色方法和原理。

实验目标

1知识目标：通过本实验，掌握显微镜的使用，并通过该实验掌握疏松结缔组织的光镜结构。

2技能目标：通过本实验，熟悉显微镜的构造和组织学绘图方法和技巧。

3素质目标：培养学生掌握结构决定功能、结构与功能相统一的原理。

4人文目标： 培养学生珍惜、爱护标本的意识，并培养学生敬畏生命的医学情怀。

实验器材

数码互动显微形态网络教学系统（显微镜、电脑）；学校虚拟仿真实验平台；光学显微镜、镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、医用纱布、抽纸、牙签等。。

实验材料

教学玻片，模型，实验动物：小鼠。

实验试剂：中性树胶、肥大细胞染色液、75%酒精、80%酒精、85%酒精、90%酒精、无水酒精、二甲苯等。

操作流程

一显微镜使用：

1．正确使用光学显微镜

（1）调线：本实验室使用的是双筒显微镜，使用前根据自己的瞳孔的瞳孔距离，调整好双目间距。

（2）对光：将低倍物镜对准载物台正中的圆孔，依次调整以下装置。

1）电源：打开显微镜光源。

2）光栅：调整光栅开孔的大小。需较强光时应将开孔调大，需弱光时应缩小。

3）聚光器：调节聚光器的位置高低。聚光器上升则视野较明亮，下降时则较暗。

（3）低倍镜观察

1）打开光源后，将镜筒升高或下移载物台，标本放置于载物台上，并用片夹固定，将观察的组织或器官移至载物台圆孔正中。注意应使标本有盖玻片的一面向上。

2）用双眼观察目镜里的视野，缓慢转动粗调旋钮，使镜筒换换下降（或载物台缓缓上升），至所观察的图像清晰为止。

（4）高倍镜观察

1）将低倍镜下需要放大观察的部分移至视野正中。

2）在低倍物镜观察清晰的前提下，换高倍物镜，无需调节粗调旋钮，只需缓慢前、后调节细调旋钮直至图像清晰为止。多数显微镜转换高倍物镜后，仅需要稍微调节细调旋钮就能得到清晰的图像。注意在用高倍物镜观察时，不可用粗调旋钮调节，否则极易损坏镜头和标本。

3）如视野不够明亮，可略上升聚光器、调整光栅或调整光源强度。

4）如反复调节细调旋钮仍得不到清晰的图像，应检查标本的盖玻片一面是否向上（如标本的盖玻片一面向下，则不能再高倍镜下观察清楚）。

5）观察完毕后，务必先将高倍物镜转换成低倍镜或升高镜筒（下移载物台）之后，方可取下标本，否则同样极易损伤镜头和标本。

二、疏松结缔组织铺片的制作与肥大细胞染色

1.制作小鼠肠系膜铺片：麻醉后脱臼处死小白鼠，腹部朝上，分别将肢端以大头针固定在蜡盘上，打开腹腔暴露肠管，于肠管间轻轻拉出肠系膜，剪切2mm2置于载物片中央，用分离针轻轻铺平，完成肠系膜铺片。

2.染色：肥大细胞染色（染色步骤见下图）。

3.普通光学显微镜观察：将中性树脂封片的肠系膜铺片置于普通显微镜下观察。

低倍镜下选取肠系膜铺片厚薄均匀的视野，再换高倍镜仔细观察肥大细胞，细胞质内颗粒呈紫红色，细胞核呈淡蓝色或无色

注意事项

（关键点）

1. 注意显微镜低倍、高倍观察的侧重点；
2. 注意观察肥大细胞的光镜结构；
3. 注意平面与立体的关系；

4.学会理论联系实际；

5.完好剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成功的关键。用镊子夹住剪开之膜的边缘，防止膜皱缩成团，用镊子将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。

实验布置情况

1 教师台放置照片：

2 学生台放置照片：

3.实验操作台放置照片：

预期结果

（评分标准）

1. 通过观察组织切片，把课堂上所学到的基本理论知识与实验课上的组织

切片相互验证，加深和巩固对组织、器官结构理论知识的理解；

2.铺片制作厚薄比较均匀，染色均匀；

3.肥大细胞形态呈圆或者椭圆形，胞质内可见大小较一致、分布较均匀的

紫红色颗粒。

4.绘制输送结缔组织结构示意图，教师根据示意图的美观、结构、文字标注等给以评分。

课程名称

组织学与胚胎学

适用专业

中医桂派杏林班、中医定向、中医养生、中医儿科、中医康复、中医骨伤、针推、壮医、护理专业

实验项目名称

血涂片标本的制作和血细胞的形态学观察

分组情况

20人/组

实验目的

1. 通过学生自己动手制作血涂片，使学生熟悉血涂片制作的基本步骤和操作技术。
2. 学活血涂片的染色方法。
3. 学会在显微镜下观察和鉴别各种血细胞。

实验目标

1知识目标：通过本实验，掌握血液的组成成分。

2技能目标：通过本实验，学会血涂片的制作方法和血液的染色方法。

3素质目标：培养学生掌握形态学技术操作方法以及分析问题和解决问题的能力。

4人文目标：培养学生适当无偿献血的奉献精神。

实验器材

医用采血针、抗凝管、载玻片、盖玻片、记号笔、棕色小口瓶、研钵、玻璃棒、Motic光学显微镜、染色缸等。

实验材料

实验动物：大鼠或者兔子。

实验试剂：瑞氏染液、生理盐水、蒸馏水、医用酒精棉球或碘酒棉球、磷酸盐缓冲液、中性树胶、二甲苯、酒精、甲醇等。

操作流程

1．兔子心脏采血的操作流程

（1）兔的抓取：缓慢轻轻靠近兔子，先用一只手抓住兔子颈部皮肤，另外一只手托住后肢抱起靠在操作者胸前。

（2）兔的保定：取仰卧保定于固定台, 用绳系牢四肢, 使头颈伸直为防止采血时兔挣扎, 助手一手拽耳固定头部, 另一手抓住兔腿, 固定后躯。

（3）采血方法

①确定心脏的生理部位。家兔的心脏部位约在胸前由下向上数第三与第四肋骨间。
②选择用手触摸心脏搏动最强的部位（剑状软骨左侧），去毛消毒。
③将稍微后拉栓塞的注射器针头由剑状软骨左侧呈30℃-45℃刺入心脏，当家兔略有颤动时，表    

明针头已穿入心脏，然后轻轻地抽取，如有回血，表明已插入心腔内，即可抽血；如无回血，可将针头退回一些，重新插入心腔内，若有回血，则顺心脏压力缓慢抽取所需血量。采血约10ml。

2．血涂片制作

首先由实验课教师讲解并示教， 最后由学生进行实际操作。具体操作步骤如下：

（1）涂片：用吸管滴一滴兔子的血液在载玻片上，然后左手持载玻片，右手以边缘平滑的另一载玻片的一端成30-45度从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后将沾有血液的载玻片以均匀的速度向前保持平稳地移动，即可在载玻片上形成均匀和厚度适中的薄层血膜。血涂片制成后可手持载玻片在空气中挥动，使血膜迅速干燥，以免血细胞皱缩。

（2）染色：用蜡笔在血膜两侧划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上，用滴管加瑞氏染液2-3滴，使覆盖整个血膜，室温下染色约1-3分钟，然后滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水，与染料混匀再染色5-10分钟。

（3）冲洗：染色结束后，先用蒸馏水或缓冲液冲洗，去掉涂片上的染料，然后用自来水温和冲去染液，至血膜呈淡红色。

（4）封片：待玻片自然干燥后或用吸水纸吸干后，中性树胶封片。

注意事项

（关键点）

1．取血不宜过多，以免涂片太厚影响观察。

2．要使涂片厚薄均匀，拿片角度应适当，速度要适中，用力要均匀。

3．涂片一般后半部较好，白细胞在其边缘和尾端较多。

4．用力过猛有时可致白细胞破损影响观察。

实验布置情况

1 教师、学生台放置照片：

2 实验操作台放置照片：

预期结果

（评分标准）

1. 辨认红细胞、各种白细胞及血小板。注意参看教材及实验指导所附的彩图。

2. 红细胞：圆形，无核，呈红色，中央着色较边缘浅。

中性粒细胞：圆形，比红细胞大，胞质呈淡红色，内含淡紫红色的细小颗粒，分布均匀。分叶，2~5叶不等，大多为2~3叶。叶间有染色质丝相连，染成蓝色，也有不分叶的杆状核。

嗜酸性粒细胞：数量较少，较中性粒细胞大，胞质呈淡红色，内含大量粗大的桔红色颗粒，分布均匀而密集。核多为2叶，染成蓝色。  

嗜碱性粒细胞：数量极少，很难找到。胞质内含大小不等的蓝色颗粒，分布不均，常遮盖核。核分叶、S形或不规则形，着色浅。几乎不见（为何？）

淋巴细胞：大小不一，以小淋巴细胞居多，其直径似红细胞。核呈圆形，占细胞的大部，一侧稍有凹陷。染色质致密呈块状，染成深蓝色。胞质少，呈一窄带围绕核，染成蔚蓝色，有时含少量紫红色的嗜天青颗粒。大的淋巴细胞胞质较多，核染色浅。

单核细胞：体积最大，数量较少。核呈肾形与马蹄铁形，染色质颗粒细而松散，故染色较浅；胞质较多，染成灰蓝色，内含较多细小的嗜天青颗粒。

血小板：体积最小，直径约为红细胞的1/3，成群分布在血细胞之间，呈不规则形，胞质染成浅蓝色，中央含紫色的颗粒。