助产学专业实验教学大纲
《组织学与胚胎学》实验大纲
课程编号：01sy3
课程性质：独立设课
课程类别：必修课
学时学分：总学时 48 总学分3实验学时12实验学分1
先修课程：人体解剖学、细胞生物学
适用专业：助产学专业
开课单位、教研室：基础医学院 组胚教研室
实验项目总数 3 ； 其中综合性实验2次；设计性实验项目数1
实验目的与要求
1．通过组织学验证性实验，培养学生熟练使用显微镜的技能以及组织学绘图技能，熟悉数码互动实验室的组成和操作；
2．通过组织学验证性实验，掌握数码互动实验显微镜的使用，通过观察显微镜下正常人体的各器官和细胞的微细结构，验证和巩固理论课知识的认识，加深对理论课知识的理解，掌握正常人体的微细结构；
3．通过组织学的综合性实验，掌握形态学常用技术的实验操作方法以及动物实验的基本操作，培养学生的形态学实验操作能力，学会在实践中自我发现问题、分析问题和独立解决问题的能力，逐步树立良好的科学作风；
4．通过模型和各种视频的学识，掌握人体胚胎早期发育过程的结构变化（空间和时间上的变化特点）。
实验教材：《组织学与胚胎学实验教程》（中国中医药出版社）和自编教材
教学目的和内容
实验一 综合性实验
综合性实验1：肥大细胞形态观察和巨噬细胞吞噬实验
【实验目的】
通过该实验掌握对疏松结缔组织光镜结构，同时通过结构特点加深对肥大细胞和巨噬细胞功能的理解，并学会制作铺片。
【实验内容】
- 实验动物：小白鼠（雌性或雄性均可，体重20-22g）
- 实验仪器和器材：注射器、天平、烧杯、分离针、镊子、剪刀、手术刀、蜡盘、染色缸、载玻片、盖玻片、光学显微镜等
- 实验试剂：0.5%台盼蓝生理盐水溶液、苏木精染液、0.5%伊红染液、甲苯胺蓝染液、生理盐水、无水酒精、二甲苯、10%福尔马林溶液、中性树胶。
- 配制甲苯胺蓝染液：苯胺油2ml倒入蒸馏水50ml，加热煮沸，混匀冷却（至40~50°C）放入甲苯胺蓝1g，待溶后加无水酒精50ml，半小时后即可使用。
【实验步骤】
１.腹腔注射与制作小鼠肠系膜铺片
（1）小鼠腹腔注射0.5-1ml/20g体重的0.5%台盼蓝水溶液，每隔一天注射一次，至耳部和尾部皮肤颜色呈蓝色为止。
（2）制作小鼠肠系膜铺片：麻醉后脱臼处死小白鼠，腹部朝上，分别将肢端以大头针固定在蜡盘上，打开腹腔暴露肠管，于肠管间轻轻拉出肠系膜，剪切置于载物片中央，用分离针轻轻铺平，完成肠系膜铺片。
2．染色：全部标本分为两组，一组显示巨噬细胞，另一组显示肥大细胞。
（1）巨噬细胞染色
（2）甲苯胺蓝染色显示肥大细胞
3.普通光学显微镜观察：将中性树脂封片的肠系膜铺片置于普通显微镜下观察。
实验二 综合性实验
综合性实验2：血涂片标本的制作和血细胞的形态学观察
【实验目的】
通过学生自己动手制作血涂片, 并在显微镜下观察各种血细胞，使学生熟悉血涂片制作的基本步骤和操作技术, 丰富形态学实验教学内容, 提高学生的学习兴趣和动手操作能力，掌握形态学实验技术。
【实验内容】
1.实验动物：健康成人或有过敏史的成人，大鼠或兔子
2.实验仪器和器材：医用采血针、酒精棉球、载玻片、盖玻片、记号笔、棕色小口瓶、研钵、玻璃棒、Motic光学显微镜等
载玻片的处理
一般将载玻片用微波清洗后，再经清洁液浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入95%酒精浸泡约1小时，用洁净绸布擦干备用。或者选用已经经过处理的载玻片和盖玻片。
3.实验试剂：瑞氏染液、生理盐水、蒸馏水、医用酒精棉球或碘酒棉球、磷酸盐缓冲液、中性树胶、二甲苯、酒精、甲醇等
瑞氏(Wright)染液的配制
瑞氏染料粉剂 0.1g
甲醇 60ml
将粉剂放入洁净干燥研钵内，滴加甲醇研磨至全溶，密封于棕色小口瓶内，放置1/2-1个月即可使用。
【实验步骤】
1. 血涂片的制作：首先由实验课教师讲解并示教， 最后由学生进行实际操作。
（1）涂片
（2）染色
（3）冲洗
（4）封片
2．血细胞的观察：将中性树胶封片后的玻片置于显微镜下进行观察。
实验三 设计性试验
中医助产学专业《小鼠胚胎发育动态跟踪观察》实验方案
背景：
2019级中医助产学专业是今年学校新增的一个专业，尽管其《组织学与胚胎学》只有20学时理论课、12学时实验课，并与《解剖学》一起合并为《人体形态学》课程，但针对其专业特点和组胚教研室的课程特色，本教研室拟对常规18～20学时理论课教学（见护理本科专业和中药学专业）只上组织学绪论和四大基本组织的上课内容进行调整，中医助产学专业20学时的理论课教学内容包括组织学绪论、上皮组织、固有结缔组织、血液、男性生殖系统、女性生殖系统、胚胎学绪论和胚胎学总论；其3次实验课主要是锻炼学生的动手能力，开设了两次特殊制片和一次胚胎学实验（人胚早期发育模型的观察、小鼠胚胎发育动态跟踪观察），其中胚胎学动态跟踪观察实验是首次尝试，以设计性实验与开放式实验教学理念相结合，并希望在后续的实际操作中不断改进和完善。
方案实施：
1.在理论课学习生殖系统时，已向中医助产学专业学生布置课外相关资料的查询，包括小鼠的生长周期（胚胎期、生后早期、哺乳期、断奶期、青春早期、性成熟期、性周期等）、雌雄小鼠外生殖器的识别图片、雌雄小鼠交配标记（阴栓）识别图片，以实验小组（每组14～16人）为单位收集资料整理成电子文档在第一次实验课前放在班级的组织学与胚胎学QQ学习群里，做到组内和组间的交流。
2. 原计划：
2019级助产专业学生人数是56人，分成4个实验小组由四位老师负责实验教学（2个实验小组为同一批上课时间段）。按常规实验课安排，应是第1、2组是单周上实验课，第3、4组是双周上实验课，这样每组的上实验课时间跨度为29天，其胚胎学实验实施方案如下（以一个实验组为例）：
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第1、2组第1次实验 |
第3、4组第1次实验 |
第1、2组第2次实验 |
第3、4组第2次实验 |
第1、2组第3次实验 |
第3、4组第3次实验 |
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第1、2组第一次制片 |
第3、4组第一次制片 |
第1、2组第二次制片 |
第3、4组第二次制片 |
第1、2组人胚早期发育模型的观察、小鼠胚胎发育动态跟踪观察 |
第3、4组人胚早期发育模型的观察、小鼠胚胎发育动态跟踪观察 |
14人分成4个实验小分队（每个小分队3～4人），学生编号如下
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第1小分队 |
第2小分队 |
第3小分队 |
第4小分队 |
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1 |
2 |
3 |
4 |
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5 |
6 |
7 |
8 |
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9 |
10 |
11 |
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动物房为每个实验小组准备14只性成熟（45～60日）的雌性小鼠和4只雄性小鼠（雌、雄小鼠不合笼），其中14只雌性由学生编号（1位学生认定1只雌性小鼠，小鼠编号如下表），在上第一次实验课时（第1天）每个小分队各取1只雌性小鼠（共4只）与4只雄性小鼠合笼交配，并在次日早晨（十点之前）观察有无阴栓，有阴栓的雌性小鼠即取出单笼饲养，做好合笼和发现阴栓的时间记录，并在第8天、第15天和第21天分别取雌性小鼠与雄性小鼠合笼（如果同一批的有未见明显阴栓的雌性小鼠，待下一批合笼时，取出单笼饲养）。具体见下表
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合笼时间 |
第1小分队 |
第2小分队 |
第3小分队 |
第4小分队 |
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第1天（第一次实验课） |
1 |
2 |
3 |
4 |
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第8天 |
5 |
6 |
7 |
8 |
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第15天（第二次实验课） |
9 |
10 |
11 |
12 |
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第21天 |
13 |
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14 |
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第29天（第三次实验课） |
处死雌性小鼠和新生小鼠，解剖受孕雌性小鼠，观察不同发育阶段的胎鼠 |
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在第3次实验课之前，每个小分队安排队员进行每天的观察，每天做好记录包括受孕后雌性小鼠的体重、外观（有文字记录和手机拍照）。因小鼠妊娠期是19～21日，期间有可能会有新生小鼠，做好新生小鼠出生日期和数量的记录，并继续观察新生小鼠的外观变化（有文字记录和手机拍照）。
第3次实验课（第29天）在动物房将参与交配的雄性小鼠和新生小鼠处死，将所有雌性小鼠（受孕雌性小鼠）带至组胚实验室，按照对应的交配时间分好组，再处死雌性小鼠，解剖其子宫，观察不同发育阶段（妊娠第7日、14日、21日）小鼠胚胎发育的情况（包括外观和解剖后各主要器官大致发育情况，文字记录和手机拍照），以小分队为单位整理资料，提供一份详实的小鼠胚胎发育记录，总结小鼠胚胎发育期的特点。
3. 实际情况：
2019级助产专业学生人数是56人，分成4个实验小组由四位老师负责实验教学（2个实验小组为同一批上课时间段）。本学期实验课实际安排是第1、2组连续三周每周1次实验课，之后第3、4组连续三周每周1次实验课，这样每组实验课上课时间跨度为15天，而小鼠的妊娠期为19～21日，因不能保证合笼交配百分之百成功，所以15天的时间跨度不能有效达到实验预期的目的，因此考虑在胚胎学实验环节中进行分组和内容的改动。
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第1、2组第1次实验 |
第1、2组第2次实验 |
第1、2组第3次实验 |
第3、4组第1次实验 |
第3、4组第2次实验 |
第3、4组第3次实验 |
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第1、2组第一次制片 |
第1、2组第二次制片 |
四个组重新分成两个组看人胚早期模型和视频 |
第3、4组第一次制片 |
第3、4组第二次制片 |
四个组重新分成两个组对不同发育阶段的小鼠胚胎进行观察 |
全班56人分成2个实验小组（每组28人，即原来的第1、2组合并，第3、4组合并），每个实验小组分成4小分队（每个小分队7人），每个实验小组学生编号如下
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第1小分队 |
第2小分队 |
第3小分队 |
第4小分队 |
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1、2 |
3、4 |
5、6 |
7、8 |
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9、10 |
11、12 |
13、14 |
15、16 |
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17、18 |
19、20 |
21、22 |
23、24 |
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25 |
26 |
27 |
28 |
动物房为每个实验小组准备16只性成熟（45～60日）的雌性小鼠和4只雄性小鼠（雌、雄小鼠不合笼），其中16只雌性由学生编号（第1～24号学生每2位学生认定1只雌性小鼠，第25～28号学生各认定一只雌性小鼠，小鼠编号如下表），在第1、2组上第二次实验课时（第1天）每个小分队各取1只雌性小鼠（共4只）与4只雄性小鼠合笼交配，并在次日早晨（十点之前）观察有无阴栓，有阴栓的雌性小鼠即取出单笼饲养，做好合笼和发现阴栓的时间记录，并在第8天、第15天和第21天分别取雌性小鼠与雄性小鼠合笼（如果同一批的有未见明显阴栓的雌性小鼠，待下一批合笼时，取出单笼饲养）。具体见下表
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合笼时间 |
第1小分队 |
第2小分队 |
第3小分队 |
第4小分队 |
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第1天（第1、2组第二次实验课） |
1 |
2 |
3 |
4 |
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第8天（第1、2组第三次实验课） |
5 |
6 |
7 |
8 |
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第15天（第3、4组第一次实验课） |
9 |
10 |
11 |
12 |
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第21天（第3、4组第二次实验课） |
13 |
14 |
15 |
16 |
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第29天（第3、4组第三次实验课） |
处死雌性小鼠和新生小鼠，解剖受孕雌性小鼠，观察不同发育阶段的胎鼠 |
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在第3、4组第三次实验课之前，每个小分队安排队员进行每天的观察，每天做好记录包括受孕后雌性小鼠的体重、外观（有文字记录和手机拍照）。因小鼠妊娠期是19～21日，期间有可能会有新生小鼠，做好新生小鼠出生日期和数量的记录，并继续观察新生小鼠的外观变化（有文字记录和手机拍照）。
第3次实验课（第29天）在动物房将参与交配的雄性小鼠和新生小鼠处死，将所有雌性小鼠（受孕雌性小鼠）带至组胚实验室，按照对应的交配时间分好组，再处死雌性小鼠，解剖其子宫，观察不同发育阶段（妊娠第7日、14日、21日）小鼠胚胎发育的情况（包括外观和解剖后各主要器官大致发育情况，文字记录和手机拍照），以小分队为单位整理资料，提供一份详实的小鼠胚胎发育记录，总结小鼠胚胎发育期的特点。
本胚胎学操作性实验实施时间为29天，需要学校动物房为本实验的开展提供实验场所，才能确保学生有每天可以观察、定期操作的机会，便于开放式实验教学的实施。
广西中医药大学基础医学院组胚教研室
2019年9月
实验考核方式
1．实验绘图成绩评分。
2．实验课堂提问考查评分。
