生物化学与分子生物学教研室

《生物化学》实验大纲

课程编号：BJ0110004

课程性质：《生物化学》课程实验教学部分

课程类别：必修课

实验学时： 36

适用专业：临床医学

开课单位、教研室：基础医学院  生物化学与分子生物学教研室

实验项目总数：7，其中综合性实验项目数：5；设计性实验项目数：2。 

实验目的与要求

生物化学实验是生物化学及一切生物学科的重要研究手段，它在对疾病的诊断、观察及发病机制的探讨方面起着越来越重要的作用。因此，生物化学实验课是医药专业学生必修的一门实用基础课程。

1. 思政元素：培养学生严谨的科学思维，自主学习、团队合作的精神，创新意识以及对生物化学的兴趣；

2. 通过生物化学实验课，使学生加深对生物化学理论知识的认识和理解；

3. 通过生物化学实验课，使学生掌握基本的生物化学实验操作及技能，如吸量管、微量移液器、分光光度计等的使用方法；

4. 通过实验使学生增强分析问题、解决问题的能力，并培养学生实事求是的科学作风。

实验教材：《生物化学实验指导》  

实验教学目标和内容

实验一   吸量管的使用、蛋白质等电点的测定

【教学目标】

知识目标： 1．掌握蛋白质两性解离性质及等电点的定义。2．学习沉淀法测定蛋白质的基本原理和方法。

能力目标：进一步掌握使用刻度吸量管量取溶液的方法。

素质目标：培养学生具备生化实验基本操作技能以及培养学生的科研思维能力。

【实验内容】

1．练习使用刻度吸量管。

2．观察酪蛋白在不同pH值溶液中的沉淀现象，粗略判断其等电点数值。

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：试管、刻度吸管、吸耳球等。

2．主要试剂：1mol/L醋酸、0.1mol/L醋酸、0.01mol/L醋酸、酪蛋白醋酸钠溶液等。

实验二  琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制

【教学目标】

知识目标：掌握酶的竞争性抑制作用的原理。

能力目标：学会小鼠解剖取肝的操作，能自行制备肝匀浆；掌握不同试管内溶液滴加的次序和手法原则、最大限度保证各管反应同步性的操作方法。

素质目标：培养学生的科学思维。

【实验内容】

1．制备小鼠肝匀浆（酶液）；

2．观察不同成分反应液的反应速度；

3．掌握竞争性抑制作用的原理。

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：恒温水浴箱、陶瓷研钵、手术剪、镊子、不锈钢托盘、一次性滴管、玻璃试管、试管架、乳胶手套等。

2．主要试剂：1.5%琥珀酸盐溶液、1%丙二酸盐溶液、0.02%甲烯蓝溶液、液体石蜡、生理盐水、蒸馏水等。

实验三  血清甘油三酯、丙氨酸转氨酶（ALT）的测定

【教学目标】

知识目标：掌握可见分光光度法测定血清甘油三酯、测定血清丙氨酸转氨酶的基本原理与方法，了解这些指标的临床意义，掌握氨（NH₃）在机体的代谢终产物。

能力目标：能熟练运用可见分光光度法检测血清甘油三酯的含量；检测血清丙氨酸转氨酶；分析氨中毒的临床表现及意义；提高学生提出问题、分析问题和解决问题的能力，并提高动手能力和实践技能。

素质目标：培养学生严谨的科学思维，及自主学习、团队合作精神和创新意识。

【实验内容】

1. 学习并练习使用可见分光光度计测定血清甘油三酯。

2. 使用可见分光光度计测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）。

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：离心机、水浴箱、可见分光光度计、试管、小烧杯、刻度吸量管、吸耳球、一次性滴管、（100-1000ul、10-100ul、0.5-10ul）三种量程的微量移液器及匹配吸头等。

2．主要试剂：甘油三酯和ALT呈色反应试剂、甘油和丙酮酸标准液等。

实验四   小鼠氨中毒及其抢救（一）

【教学目标】

知识目标：

1．掌握人体内氨的来源与去路，及氨中毒的生化机制；

2．熟悉糖代谢、含氮物质代谢、能量代谢等对氨吸收与代谢的影响；

3．了解氨吸收与中毒的影响因素，及氨中毒的临床表现和常用的抢救或治疗措施。

能力目标：

1. 培养学生通过理论联系实际，自主设计实验的能力与科学探究能力；

2. 通过对实验方案、过程和结果的分析与探讨，提高学生提出问题、分析问题和解决问题的能力，及组内同学沟通能力与团队协作能力；

3. 通过试剂配制、小鼠腹腔注射给药操作等，及实验过程中对小鼠氨中毒生理表现的观察等，锻炼学生的观察能力和动手能力。

素质目标：

 1. 使学生充分参与课堂，调动学生学习的积极性；

 2. 使学生认识到实验动物模型建立的基本思路和重要性，及实验设计的科学性和实验操作的可行性之间的关联及意义，培养其严谨的科学思维；

 3. 通过小组自主设计并完成实验，培养学生的创新意识与团队精神。

【实验内容】

根据所学知识，自行设计实验方案，探讨氨吸收及中毒的影响因素，并完成实验。

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：电子天平、手持型pH计等。

2．主要试剂：氯化铵、盐酸溶液、氢氧化钠溶液、鸟氨酸、精氨酸、瓜氨酸、呋塞米、甘露醇等。

  实验五  小鼠氨中毒及其抢救（二）

【教学目标】

知识目标：

1．掌握人体内氨的来源与去路，及氨中毒的生化机制；

2．熟悉糖代谢、含氮物质代谢、能量代谢等对氨吸收与代谢的影响；

3．了解氨吸收与中毒的影响因素，及氨中毒的临床表现和常用的抢救或治疗措施。

能力目标：

1. 培养学生通过理论联系实际，自主设计实验的能力与科学探究能力；

2. 通过对实验方案、过程和结果的分析与探讨，提高学生提出问题、分析问题和解决问题的能力，及组内同学沟通能力与团队协作能力；

3. 通过试剂配制、小鼠腹腔注射给药操作等，及实验过程中对小鼠氨中毒生理表现的观察等，锻炼学生的观察能力和动手能力。

素质目标：

 1. 使学生充分参与课堂，调动学生学习的积极性；

 2. 使学生认识到实验动物模型建立的基本思路和重要性，及实验设计的科学性和实验操作的可行性之间的关联及意义，培养其严谨的科学思维；

 3. 通过小组自主设计并完成实验，培养学生的创新意识与团队精神。

【实验内容】

根据所学知识，自行设计实验方案，探讨小鼠氨中毒的抢救措施，并完成实验。

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：电子天平、手持型pH计等。

2．主要试剂：氯化铵、盐酸溶液、氢氧化钠溶液、鸟氨酸、精氨酸、瓜氨酸、呋塞米、甘露醇等。

实验六  激素对家兔血糖浓度的影响

【教学目标】

知识目标：1．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理及方法；2．熟悉家兔耳缘静脉取血、肌肉注射的方法，熟悉离心机的使用；3.了解激素对血糖调节的作用；

能力目标：能自主完成家兔取血、注射激素、血清制备、血糖测定的实验操作；能熟练使用离心机、可见光分光光度计。

素质目标：培养学生的科学思维和团队合作精神。

【实验内容】

1.对家兔进行耳背下缘静脉取血及大腿内侧皮下注射激素；

2.分离血清；血液静置凝固，离心处理。

3.葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：离心机 、722型分光光度计、水浴锅（37℃）、试管、刻度吸量管、微量移液器、手术剪、刀片、止血钳、1ml注射器、离心管、棉花、棉签等。

2．主要试剂：胰岛素（1ml＝4单位）、肾上腺素（1ml＝1mg）、血糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）、75%酒精、凡士林等。

实验七  全血DNA的提取与鉴定

【教学目标】

知识目标：1．掌握DNA提取的原理；2．熟悉血液DNA提取方法和步骤；3．掌握DNA琼脂糖凝胶电泳的原理；4. 熟悉琼脂糖凝胶电泳和成像的实验操作。

能力目标：掌握全血DNA提取试剂盒的使用、琼脂糖凝胶电泳及凝胶成像系统的使用，分析操作过程各步骤的原理和要点。

素质目标：培养学生的严谨的科学思维。

【实验内容】

1．全血DNA提取

2．DNA琼脂糖凝胶电泳

3．凝胶成像操作

实验主要仪器设备试剂

1．主要仪器设备：高速离心机、水浴箱、微波炉、电泳槽、电泳仪、凝胶成像系统、1.5ml和2.0ml EP管，一次性滴管、（100-1000ul、10-100ul、0.5-10ul）三种量程的微量移液器及匹配吸头等。

2．主要试剂：全血DNA提取试剂盒（市售）、0.8%琼脂糖、10×TBE、50×TAE、溴酚蓝上样缓冲液（Loading buffer）（市售）、GelRed核酸染料（市售）等。

实验考核方式

1．实验报告成绩评分。

2．平时实验操作考查评分。

实验项目汇总及课时分配

教研室主任（签字）：                         编写人（签字）： 

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