《人体寄生虫学》实验指导2020 口腔
《人体寄生虫学》实验指导
前言
人体寄生虫学是医学专业的专业基础课程之一，它既是一门形态科学，又是一门实验性科学。对于一个医学生而言，实验目的主要包括两个方面：①加深理解、巩固和掌握本学科的基本理论知识；②掌握寄生虫检验的基本技能，重点应牢固掌握常见寄生虫的形态特点和实验诊断技术。为此，要求学生通过理论学习后，在实验教学中进行实验操作、观察标本和训练技术，达到以上目的，为今后从事寄生虫病的诊断、防治和研究打下坚实的基础。
实验教材：自编教材
实验学时：12学时
实验一 线虫与市售蔬菜污染寄生虫检查
（综合性实验，4学时）
【实验目的与要求】
1． 掌握常见线虫(蛔、钩、鞭、蛲)虫卵的形态特征
2．熟悉光学显微镜的使用方法。
3．学习绘制线虫卵图的基本技术。
4．掌握常见线虫(蛔、钩、鞭、蛲、丝虫)成虫和旋毛虫囊包的形态结构特征
5． 了解蛔虫、钩虫、鞭虫等对人体的危害。
6． 学习蔬菜中寄生虫的检查方法和步骤。
【实验仪器、器材与试剂】
一、线虫的形态结构观察
（一）显微镜
（二）材料
2．标本封片：线虫卵封片、旋毛虫囊包封片、钩虫口囊封片、蛲虫卵封片、蛔虫含蚴卵封片、蛔虫受精卵封片、蛔虫未受精卵封片、钩虫卵封片、肝吸虫成虫封片、肺吸虫成虫封片等
3．大体标本：常见线虫、肝吸虫和肺吸虫成虫的浸制标本及其引起疾病的病理标本。
二、蔬菜检查：
1.离心机、离心管、1000mL烧杯、显微镜、载玻片、盖玻片、量筒、滴管、碘染液
2.检查材料：香菜、小葱、红薯叶、苋菜等应季蔬菜
【实验内容、方法与步骤】
（一）蛔虫的形态结构
蛔虫成虫寄生于人体小肠。雌雄虫体交配后产出受精蛔虫卵，单雌性可产出未受精蛔虫卵，并随人体粪便排出。受精蛔虫卵在外界适宜条件下约经1个月可发育为含蚴卵（又称感染性蛔虫卵）。
人感染蛔虫是因误食感染期虫卵所致。幼虫可致肺组织损害，引起异位寄生。成虫寄生小肠并夺取宿主营养，损伤肠黏膜，更为严重的可引起肠梗阻、胆道蛔虫症和蛔虫性阑尾炎等急腹症。
1．受精蛔虫卵（观察玻片标本） 镜下观察可见虫卵呈宽椭圆形或圆形，大小约为（45～75）µm × （35～50）µm（在蠕虫卵中属中等大小），表面有一层凹凸不平的蛋白质膜（因受宿主胆汁染色呈棕黄色），卵壳厚（无色），为所有蠕虫卵中最厚者，卵内含一个大而圆的卵细胞，卵细胞与卵壳之间一般有半月形间隙，也有些是没有半月形间隙的。
2．未受精蛔虫卵（观察玻片标本） 镜下见虫卵呈长椭圆形，有时其形状不甚规则，大小约为（88 ～ 94）µm ×（39 ～ 44）µm ，棕黄色，蛋白质膜与卵壳均较受精卵薄，卵内充满大小不等的折光性强的卵黄颗粒。
3．含蚴卵（观察玻片标本） 在镜下观察到卵内含一条卷曲的幼虫（或多细胞的胚胎结构），其他结构同受精蛔虫卵。
4．无蛋白膜蛔虫卵（观察玻片标本） 蛔虫受精卵与未受精卵及含蚴卵的蛋白膜均可脱落形成无色透明的无蛋白膜卵。观察时应注意同钩虫卵、蛲虫卵及植物细胞等区别，同时注意显微镜光线不要太强。
5．成虫外部形态（观察浸制标本） 肉眼观察虫体呈长圆柱形，两端较细，外形似蚯蚓，活时呈粉红色或微黄色，死后经福尔马林固定后呈灰白色。虫体体表有横纹，两侧各有一条侧线。雌虫较大，长约20～35cm，尾部钝圆而直。雄虫较小，长约15～31 cm，尾部向腹面卷曲，有一对镰状交合刺。
6．成虫内部结构（观察浸制标本） 观察虫体内生殖与消化器官，从虫体解剖标本中肉眼可以看到，虫体体腔内除一条直的消化管外，其余均为生殖器官，无论是子宫，还是卵巢都呈管状结构，雌性生殖系统为双管型，从中可理解到蛔虫产卵量大、繁殖力强的生理功能特点。雄性生殖系统为单管型。
7．病理标本（观察浸制大体标本）
（1）蛔虫性肠梗阻可见蛔虫扭结成团，完全或部分阻塞肠道。
（2）蛔虫性阑尾炎可见蛔虫钻入阑尾。
（3）胆道蛔虫病可见蛔虫钻入胆道、胆囊，严重的可见钻入肝脏。
（4）蛔虫性肠穿孔，肉眼可见蛔虫从肠壁钻出，引起穿孔。
（5）肝脏中的蛔虫：肉眼可见蛔虫幼虫异位寄生在肝脏。
（二）鞭虫的形态结构
鞭虫寄生于人体盲肠内，严重感染可寄生于回肠下段和结肠、直肠，虫卵随人体粪便排出后，约3周在外界发育为感染期虫卵，被人吞食后，幼虫在小肠中孵出，下行至回盲肠部发育为成虫。
1．虫卵（观察玻片标本） 纺锤形，大小为（50～54）µm×（22～23）µm，棕黄色，卵壳厚，两端各有一塞状透明栓，内含一个受精的卵细胞。
2．成虫（观察浸制标本） 用肉眼观察成虫的外部形态特征，外形似马鞭，前2/3细长，后1/3较粗，咽管细长。雌虫长（35～50）mm，尾端钝圆。雄虫长（30～45）mm，尾端向腹面呈环状卷曲，末端有一交合刺。两性生殖系统均为单管型。
3．病理标本（观察浸制大体标本） 鞭虫寄生于结肠壁（注意鞭虫的寄生方式）。从病变的肠壁上虫体寄生处，肉眼可见以虫体为中心的肠壁组织呈环形隆起、充血。虫体后1/3粗端游离在肠壁外，虫体前2/3细端插人肠黏膜内。提醒在临床实际工作中，千万不要硬性拉拽虫体，以免虫体拉断，虫体细端残留在肠壁内，加重肠壁炎症症状。
（三）钩虫的形态结构
钩虫寄生在人体小肠，虫卵随人体粪便排出，在适宜条件和合适的土壤环境下，孵出杆状蚴并发育至丝状蚴，丝状蚴具感染性，可钻人人体皮肤而引起感染，传播途径与鲜粪施肥及耕作方式有关。幼虫随血流至肺，再移行到小肠而发育为成虫。十二指肠钩虫与美洲钩虫的成虫形态有显著差别，而虫卵却非常相似。钩虫感染的主要危害是导致宿主慢性失血，从而引起的一系列临床症状。
1．虫卵（观察玻片标本） 镜下观察时，注意与蛔虫脱蛋白膜卵、蛲虫卵的区别。观察过程中光线不要太强。虫卵无色透明，长椭圆形，大小约为（56～76）µm×（36～40）µm，卵壳极薄，卵内多含4～8个卵细胞；若患者便秘或粪便放置过久，卵内细胞继续分裂可发育到桑椹期或发育为幼虫期。卵细胞与卵壳之间有一圈明显的透明间隙。十二指肠钩虫卵与美洲钩虫卵极为相似，不易区别。
2．成虫（观察染色玻片标本） 比较观察两种钩虫成虫的口囊、交合伞、交合刺形状及其背腹肋分支。两种钩虫的口囊不同：十二指肠钩虫有两对钩齿，美洲钩虫则一对板齿。两种钩虫的交合伞也不同：如十二指肠钩虫交合伞中的背腹肋远端分两支，每支再分三小支；而美洲钩虫则是基部先分两支， 每支远端再分两小支。
3．成虫（观察浸制标本） 钩虫病患者经驱虫后，用粪便掏虫法可收集到成虫，保存于5％福尔马林液中。肉眼观察两种钩虫的体态及雌、雄虫的区别。十二指肠钩虫与美洲钩虫，体壁均略透明，活时均为肉红色，死后乳白色，长约lcm。雌虫均比雄虫大，雌虫尾端呈圆锥状，雄虫尾端膨大成伞形。两种钩虫虫体弯曲情况不同，十二指肠钩虫呈“C”形，美洲钩虫则呈“S”形，可作为虫种鉴别特征之一。
4. 病理标本（观察浸制大体标本）
钩虫寄生于小肠：注意观察钩虫利用发达的口囊（板齿或钩齿）咬附在小肠上。
（四）蛲虫的形态结构
蛲虫寄生于人体回肠盲部，严重感染也会寄生于结肠及阑尾，雌虫在宿主肛周产卵，约经6小时后发育为感染期虫卵，可引起自体反复感染和异体感染。
1．成虫（观察浸制标本） 患者经驱虫后由粪便中收集雌、雄成虫，或者在受感染儿童人睡时，可从肛周检获到雌性蛲虫，保存于10%福尔马林中。用肉眼直接观察，可见虫体呈乳白色，长约lcm，虫体中部因充盈虫卵的子宫使外形呈长纺锤形，后1/3直而尖细。
2．成虫（观察染色玻片标本） 注意观察蛲虫虫体的特征性结构头翼和食管球，是虫体鉴定的主要依据。低倍镜下可见虫体头端两侧角皮膨胀呈翼状，半透明，称头翼。食管末端膨大呈球形，称为食管球。子宫内充满虫卵，尾尖细。
3．虫卵（观察玻片标本） 先用低倍镜再转高倍镜观察，注意光线不宜太强，虫卵无色透明，呈两侧不对称的椭圆形，一侧平，一侧稍凸出，双层卵壳，大小约为（50～60）µm×（20～30）µm，卵内含一蝌蚪期胚胎或幼虫，经短时发育即为感染期虫卵。注意与钩虫卵和无蛋白膜蛔虫卵的相鉴别
（五）丝虫的形态结构
人体淋巴系统寄生的丝虫主要有班氏和马来两种。成虫在人体淋巴系统内，雌雄虫交配后，产出微丝蚴，周期性地出现于周围末梢血液内，在蚊体内发育为感染期幼虫后，通过蚊的叮咬经皮肤而使人感染。两种丝虫成虫形态相似，但微丝蚴有显著不同。
丝虫感染的实验诊断依据从血、尿或各种淋巴组积液标本中查见微丝蚴，淋巴结中查见成虫。但在临床上有不少丝虫病患者查不到病原体，故常采用间接免疫荧光抗体试验和ELISA等免疫学方法作辅助诊断。
1．成虫（观察大体标本） 虫体细长，似丝线，乳白色，雄虫尾部向腹面卷曲，雌虫较雄虫长，尾部不卷曲。
2．两种微丝蚴（观察苏木素染色标本） 先用低倍镜观察，在低倍镜视野下白细胞呈极小点状物，微丝蚴本身无颜色，经染色后为紫蓝色，形状为细小弯曲的线状虫体，转高倍镜（或油镜）进一步比较观察两种丝虫微丝蚴的头间隙大小、体态变化、体核分布与密度以及有无尾核等，可见班氏微丝蚴的体核圆形或椭圆形，大小均匀，排列疏松，清晰可数，无尾核；而马来微丝蚴的体核不规则，大小不等，排列密集，彼此重叠，不易分清，有尾核。
(六)旋毛虫的形态结构
旋毛虫是猪、鼠等动物的常见寄生虫，成虫和幼虫均寄生在同一宿主体内。人因生食或半生食含有幼虫囊包的猪肉或其它动物肉而感染，在小肠内发育为成虫。雌虫产出幼虫经血循环散布于全身组织，但幼虫仅在横纹肌内发育形成囊包。
对旋毛虫感染的实验诊断依赖于在患者肌肉组织中查见幼虫囊包为依据。在临床或流行病学调查现场常用肌蚴抗原作ELISA法和环蚴沉淀试验来辅助诊断旋毛虫病或旋毛虫感染，由于旋毛虫肌蚴与其他寄生虫有共同抗原，故应注意其出现假阳性反应。
观察肌肉内旋毛虫幼虫（观察玻片标本） 镜下观察在横纹肌中的幼虫囊包，可见囊包呈梭形，与肌纤维平行，内含1—2条卷曲的幼虫，长约100µm，直径仅6µm左右，盘曲数周。
【实验报告】
一、绘图： 1. 蛔虫受精卵 2. 钩虫卵 3.蛲虫卵 4.鞭虫卵
二、蔬菜检查实验报告
实验二 吸虫形态结构观察与大学生蠕形螨感染检查
（综合性实验，4学时）
【实验目的与要求】
1. 掌握常见吸虫(肝吸虫、姜片虫、肺吸虫、日本血吸虫)虫卵的形态特征和病原学诊
断方法
2．熟悉常见吸虫成虫的形态结构特征
3．认识各种吸虫的中间宿主，了解各种吸虫的感染途径、感染方式、寄生部位与致病作用
防治要点。
4. 掌握两种蠕形螨的形态特征和病原学诊断方法
【实验仪器、器材与试剂】
一、吸虫形态结构
1．显微镜
2．封片：吸虫卵封片、姜片虫成虫封片、肝吸虫成虫封片、日本血吸虫成虫封片、肝片形吸虫封片、
3．大体标本：常见吸虫成虫、绦虫及中间宿主的浸制标本及其引起疾病的病理标本。
二、大学生蠕形螨检查
显微镜、玻片、盖玻片、透明胶、药勺、石蜡油、卷纸、大烧杯、生理盐水、牙签
【实验项目、方法与步骤】
（一）姜片虫
姜片虫寄生于人和猪的小肠内，又称肠吸虫。虫卵随粪便排出后入水，在水中孵出毛蚴侵人扁卷螺，经胞蚴、雷蚴、尾蚴各期发育，尾蚴从螺体逸出，在水生植物媒介上形成囊蚴，人因生吃含有此囊蚴的菱角及荸荠等水生植物或饮生水而感染
1．虫卵（观察玻片标本） 肠吸虫卵是人体常见蠕虫卵中最大者之一，椭圆形、淡黄色，大小为（130～14）0µm×（80～85）µm，卵壳薄，一端有个不明显的卵盖，卵内含卵细胞一个，卵黄细胞20～40个，但在固定标本中不易见到卵细胞。
2．成虫（观察浸制标本） 活虫体为肉红色似瘦肉片，死虫或固定后浸制标本为灰白色似姜片状。虫体较大，背腹扁平，前窄后宽，长（20～75）mm，宽（8～20）mm，厚（0.5～3）mm。口吸盘近体前端，直径约0.5mm，腹吸盘靠近口吸盘后方，肉眼可见形如漏斗状，肌肉发达，较口吸盘大4～5倍。
3．成虫（观察染色标本） 观察虫体的外形、大小、口腹吸盘、消化系统及生殖系统，并注意位置关系。肉眼或低倍镜下可见虫体中的腹吸盘，口吸盘，咽与一短食管，两肠支呈波浪状弯曲，向后延伸至虫体末端。雌雄同体，两睾丸高度分支呈珊瑚状，前后排列于虫体的后半部。卵巢分三瓣，子宫盘曲在卵巢和腹吸盘之间。缺受精囊，具劳氏管。卵模和梅氏腺明显可见。卵黄腺发达，位于虫体两侧。生殖孔位于腹吸盘的前缘。
4．水生植物媒介（观察浸制标本） 水生植物如菱角、荸荠、茭白等为此虫的植物媒介，尾蚴在这些水生植物的表面形成囊蚴。
5．扁卷螺（观察浸制标本） 是姜片虫的中间宿主，形体扁平，体小呈棕黄色，常漂浮于水面出体外。
（二）肝片形吸虫
肝片形吸虫为牛、羊等动物胆道常见寄生虫，人体亦可通过生食水生植物或喝生水获得感染。实验诊断需粪检虫卵。
1．成虫（观察浸制标本） 虫体与姜片虫虫体相似，但肝片形吸虫虫体前端有一明显突出的头锥，这是与姜片虫形态不同的最主要区别之一。睾丸高度分支位于虫体中部。
2．成虫（观察染色玻片标本） 虫体大小为2～5cm×0.8～1.3cm，头锥明显，口吸盘位于头锥的前端，腹吸盘较小，位于头锥基部，肠支呈树枝状。睾丸两个，高度分支，前后排列，位于虫体中部。
3．虫卵（观察玻片标本） 椭圆形，较姜片虫卵稍窄长，淡黄色，（130～150）µm×（63～90）µm，卵壳薄，一端有小盖，卵盖亦较姜片虫卵盖大，卵内含卵细胞和卵黄细胞。
（三）日本血吸虫
该虫寄生于人体和哺乳动物肝门静脉系统，雌虫产卵于肠系膜下静脉末梢，虫卵随人体粪便排出体外（为什么？）。卵内毛蚴在水中孵出，侵入钉螺，在其体内经母胞蚴、子胞蚴、尾蚴三个阶段的发育和繁殖，尾蚴从螺体逸出至水中，人因下水接触尾蚴而感染。
在粪中查见虫卵或孵出毛蚴或作肠粘膜活检查到活卵或近期变性卵为确诊本病的依据。由于日本血吸虫寄生于人体肠系膜血管中，虽说其虫卵可随溃破的肠黏膜排入肠腔，使之在粪便中有机会查见病原体，但是当肠壁出现纤维化后，很难通过检查粪便作出病原诊断，加之作病原检查的方法操作繁琐，效率低，故也常采用免疫学的方法来辅助诊断血吸虫病。
1．虫卵（观察玻片标本） 虫卵平均大小为（89×67）µm，椭圆形，淡黄色，壳薄，无卵盖，一侧可见一小棘（不是所有的虫卵都可见），其内部毛蚴一般已发育成熟。
2．成虫
（1）观察浸制标本 雌、雄异体。雌虫细长呈线形圆柱状，黑褐色。雄虫较雌虫粗短，背腹扁平，两侧向腹面卷曲，形成抱雌沟，故作肉眼观察时，似呈圆柱状，虫体为白色。
（2）观察染色标本 在低倍镜下，主要观察口、腹吸盘位置，雌虫卵巢的形状和位置，雄虫睾丸位置、数目（7个）及排列方式（串珠样），抱雌沟的形状。
3．中间宿主――钉螺（观察浸制标本）
螺体长约10mm，宽约3-4mm，呈塔形，6～9个螺层，属小型螺类，壳口卵圆形，周缘完整，外缘背侧有一条粗的隆起称唇嵴。钉螺表面在平原地区的有肋壳，在山丘地区表面光滑。
4．观察寄生部位标本
肉眼观察可见兔肝门静脉和肠系膜下静脉中有黑色呈线形的虫体，即是血吸虫的雌虫。
5．观察病理标本 肉眼观察兔肝病变标本，并与与正常兔肝作比较，可见病肝表面粗糙，呈黄灰色。
（四）肝吸虫
肝吸虫寄生在人或猫、狗的肝胆管内。含毛蚴的虫卵随胆汁流人肠腔，再随粪便排出体外，入水后被第一中间宿主淡水螺（纹沼螺、豆螺、涵螺）食入，毛蚴在其体内孵出，经胞蚴、雷蚴、尾蚴各期发育和无性繁殖，尾蚴从螺体逸出，侵人第二中间宿主淡水鱼虾，发育为囊蚴。人主要是因食入生的或半生的含囊蚴的淡水鱼虾而感染。猫、狗为本虫的主要保虫宿主。
从粪便或十二指肠引流液中查见肝吸虫卵是本病实验诊断的依据，免疫诊断在临床上也较常用。
1．成虫（观察浸制标本） 肉眼观察，虫体较小，大小一般为（10～25）mm × （3～5）mm，背腹扁平，前端尖细，后端略钝。体壁较薄，半透明。
2．成虫（观察染色玻片标本） 低倍镜下观察，体壁无棘，口吸盘略大于腹吸盘，腹吸盘位于体前1/5之腹面，消化道的前部有口、咽及短的食管，然后分叉为两肠支伸至虫体后端，肠支较直，末端是盲端。两个睾丸前后排列于虫体后端1/3处，呈分支状，从睾丸各发生一支输出管，约在虫体的中部会合为输精管，向前逐渐膨大形成储精囊，储精囊接射精管开口于生殖腔，无阴茎和阴茎袋。卵巢边缘分叶，位于睾丸之前，受精囊在睾丸和卵巢之间，呈椭圆形。劳氏管细长，弯曲，开口于虫体背面。卵黄腺滤泡状，分布于虫体两侧，从腹吸盘向下延至受精囊水平。输卵管的远端为卵模，周围为梅氏腺。子宫从卵模开始盘绕而上，开口于腹吸盘前端的生殖腔，高倍镜下子宫可见大量虫卵。
3．虫卵 (观察玻片标本) 是最小的人体寄生虫卵之一。虫卵呈黄褐色，大小约为（29×17）µm，低倍镜下外形似芝麻。卵壳较厚，虫卵较窄的一端有明显的小盖，盖周围的卵壳增厚，形成肩峰，卵盖的另一端为卵壳增厚而形成的逗点状突起，称小疣（不是每个虫卵都可见），卵内有一发育成熟的毛蚴。
4．囊蚴（观察新鲜标本） 囊蚴为椭圆形，大小为（138×115）µm，两层囊壁，幼虫排泄囊明显，可用两张载玻片取鱼肉压片观察新鲜标本。
5．纹绍螺、豆螺（观察浸制标本） 为淡水螺类，是肝吸虫病的第一中间宿主。
6．淡水鱼、虾（示教浸制标本） 鲤科鱼和野生的麦穗鱼感染率较高。
7．病理标本（观察浸制标本） 成虫寄生于肝脏胆管内所致病变。从肝断面肉眼可见肝胆管管壁增厚、管腔因虫体和虫卵的充盈而阻塞。
（五）肺吸虫
肺吸虫主要有卫氏和斯氏两种，这里介绍卫氏并殖吸虫。该虫主要寄生于人体肺部，虫卵随痰或粪便排出人体外，在水中孵出毛蚴，侵入第一中间宿主川卷螺，经几代无性增殖为尾蚴。尾蚴从螺体逸出后，侵入石蟹或蝲蛄体内发育为囊蚴。人生食含有囊蚴的蟹类或蝲蛄而感染。
诊断本病需从患者痰液或粪便中查见虫卵或在皮下包块中查见虫体为确诊依据，但通常不易查到病原体，故对疑有肺吸虫病的病人应首先作免疫学检查。常用其成虫制备抗原检测体内相应抗体，或制备出单克隆抗体检测肺吸虫循环抗原或循环免疫复合物。
1．虫卵(自学玻片标本) 取虫卵封片标本或虫卵悬滴液标本进行观察。虫卵大小为（80～118）µm×（48～60）µm，但形态变异明显，多呈椭圆形，较大的一端有一明显卵盖，较小的另一端卵壳增厚。虫卵呈金黄色或黄褐色。卵内有十多个卵黄细胞，如为新鲜虫卵，则可在其中见到一个卵细胞。
2．成虫(观察浸制标本) 背隆腹平，约黄豆大小，活虫体可因伸缩而变形；活时呈红褐色，死后为灰白色。
3．成虫(观察玻片染色标本) 口、腹吸盘大小相似，肠管呈波浪形弯曲于虫体两侧；子宫与卵巢左右并列于虫体中部，两个睾丸左右并列于两卵巢之后。
4．病理标本 (观察时应注意联系其致病机制)
肺吸虫病肺（观察狗肺福尔马林固定标本） 肉眼可见肺表面有一个个虫囊，囊内有1～2个虫体。
5．第一中间宿主―― 川卷螺（观察浸制标本）
川卷螺属黑螺科，中等大小，贝壳呈长圆锥形，壳顶钝。孳生于山溪。
6．第二中间宿主―― 溪蟹、蝲蛄（观察浸制标本）
溪蟹、蝲蛄等甲壳类动物。蝲蛄多见于我国东北部，活体是青褐色的，形状似龙虾而小，第一对足呈螯状，嘴角两侧长有护须和两根尖锐的刺针，头部、螯足、尾部都比小龙虾小。生活在没有污染的河流小溪等石头多的水域中。
二、大学生蠕形螨检查
（一）蠕形螨的检查
1. 透明胶纸法 晚上睡觉前，把长约5cm的透明胶纸粘贴于面部的额、鼻、鼻唇沟、颧及颊部等处或面部有皮损处，至次晨取下，贴于载玻片上，镜检前先在透明胶纸和玻片之间滴加液体石腊或甘油1～3滴。然后先用低倍镜检查，找到虫子后再转高倍镜仔细观察。
2. 挤刮法：用不锈钢药匙刮取毛囊或皮脂腺分泌物，也可用手从鼻沟、鼻尖或鼻翼处挤出皮脂分泌物，置于己加一滴甘油或液体石腊的载玻片上，将分泌物涂布开来，加上盖玻片，先在低倍镜下检查，然后转高倍镜观察。
3. 粘挤法：用长约5cm的透明胶纸粘贴于面部的额、鼻、鼻唇沟、颧及颊部等处，然后用手从透明胶纸粘贴处的皮肤上挤出毛囊或皮脂分泌物，再轻压一下胶纸（使分泌物充分粘到胶纸上），取下透明胶纸，贴于已滴加液体石腊或甘油的载玻片上，置显微镜下检查。
（二）蠕形螨成虫的观察
寄生于人体的蠕形螨分为毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨两种。镜下可见虫体为蠕虫形，乳白色，半透明。成虫长度0.1～0.4mm，体表布满环形皮纹；虫体分为颚体、足体和末体三部分。
1. 颚体：位于虫体前端、梯形。
2. 足体：腹面有足四对，粗短呈套筒状，能伸缩。雌虫生殖孔位于腹面第4对足之间，雄虫阳茎位于背面第2对足之间；如看到足三对，是蠕形螨的幼虫。
3.末体：细长，指状，有明显的环状横纹。毛囊蠕形螨末体约占身体长度的2/3～3/4，末端较钝圆；皮脂蠕形螨末体约占躯体长度的1/2，末端略尖，呈锥状。
（三）蠕形螨虫卵的观察
采用挤刮法和粘挤法检查蠕形螨时可能会观察到虫卵，两种虫卵的形态不同，毛囊螨为蘑菇状，皮脂螨呈椭圆形。
【实验报告】
一、绘制图片：
1．肝吸虫卵 2．日本血吸虫卵 3.
二、蠕形螨检查实验报告
实验三 绦虫、原虫形态结构观察与学生中口腔原虫检查
（综合性实验，4学时）
【实验目的与要求】
1.掌握常见绦虫的形态特征和病原学诊断方法；
2.熟悉常见绦虫成虫的形态结构特征；
3.掌握阴道毛滴虫、溶组织内阿米巴、弓形虫的形态特征；
4.熟悉油镜的使用；
5.掌握口腔原虫的病原学诊断方法。
【实验仪器、器材与试剂】
一、绦虫和原虫形态结构观察：
1．显微镜
2．封片：猪带绦虫头节封片、牛带绦虫头节封片、猪带绦虫孕节封片、牛带绦虫孕节封片、猪带绦虫囊尾蚴封片、绦虫卵、阿米巴包囊封片、阴道毛滴虫封片、贾第虫包囊封片、弓形虫封片
3．大体标本：绦虫及中间宿主的浸制标本及其引起疾病的病理标本。
二、大学生口腔原虫检查
显微镜、玻片、盖玻片、卷纸、大烧杯、生理盐水、牙签
【实验项目、方法与步骤】
一、绦虫和原虫形态结构观察
（一）猪带绦虫
1．成虫（观察浸制标本） 肉眼观察虫体的外形、大小、颜色，注意各节片长宽比例、厚薄等构造及其特点。虫体背腹扁平，体壁较薄，略透明呈乳自色，长约2～4m，由700～1000节组成，近颈部的幼节，节片短而宽，中部的成节近方形，末端的孕节则为长方形。每一节片的侧面有一生殖孔，略突出，不规则地分布于链体两侧。
2．头节（观察玻片标本） 头节近似球行，直径0.6～1.0mm，具有4个吸盘，一个顶突，其基部上有25 ～50个小钩，排列内外两圈，内圈的小钩较大，外圈的稍小，颈部较细。
3．成节（观察玻片标本） 解剖镜下观察：每一成节具雌、雄生殖器官各一套，睾丸约150～200个，输精管向一侧横走，经阴茎囊开口于一生殖腔；阴道在输精管的后方；卵巢在节片1/3中央，分为三叶，除左右两叶外，在子宫和阴道之间另有一中央小叶；卵黄腺位于卵巢之后。
4．孕节（观察染色标本） 孕节中充满虫卵的子宫向两侧分支，每侧约7～13支(放大镜或或显微镜观察子宫侧支数目，计算时从基部数起)，每一支又继续分支，呈不规则的树枝状。
5．囊尾蚴（观察玻片和浸制标本） 肉眼可见囊尾蚴卵圆形，大小约5mm×10mm，白色半透明的囊泡，内充满透明的囊液。囊壁分两层，外为皮层，内为间质层，间质层有一处向囊内增厚形成向内翻卷收缩的头节，其构造与成虫的头节相似。
6．虫卵（观察玻片标本） 镜下观察虫卵呈圆球形，直径31～43µm，卵壳薄，卵壳内为胚膜，虫卵自孕节散出后，卵壳多已脱落，称不完整卵。胚膜较厚，棕黄色，由许多棱柱体组成，在光镜下呈放射状条纹。胚膜内含球形的六钩蚴，有3对小钩。
7．病理标本（观察浸制大体标本）
(1)心囊虫病 肉眼观察心肌纤维间有多个黄豆大小、乳白色的囊状物。
(2)脑囊虫病 肉眼观察脑组织间有多个黄豆粒人小、乳白色的囊状物，在脑组织中呈圆形
(3)肌肉囊虫病 肉眼观察心肌纤维间有多个黄豆大小、乳白色的囊状物。
（二）牛带绦虫
1．成虫（观察浸制标本） 外形呈带状，体分节，体长4～8m，由1000～2000节组成。由于牛带绦虫体壁较猪带绦虫体壁略厚，故虫体颜色微黄。虫体与猪带绦虫相似，也分为头节、颈节和链体3部分。
2．头节（观察染色玻片标本） 呈方形，具4个吸盘，无顶突和小钩，这是与猪带绦虫形态不同的鉴别点之一。
3．成节（染色玻片标本观察） 近方形，可见雌雄性生殖器官各一套，卵巢分2叶，卵黄腺位于节片中央后部。管状的子宫，从节片中央向前延伸为盲囊。节片上方及两侧散在小圆形滤泡状的睾丸，每节约数百个，生殖孔在节片的一侧。
4．孕节（观察染色玻片标本） 呈长方形，子宫发达，内充满虫卵，自主干向两侧分支，子宫分支较整齐，每侧一级分支，自子宫基干同侧数子宫的分支数为15～30支。注意同猪带绦虫孕节区别。
5．囊尾蚴（观察染色玻片标本） 外观与猪囊尾蚴相似，难以区别。唯一不同的是头节结构不同（在镜下可鉴别），囊内凹陷的头节与其成虫头节结构相同。
6．虫卵（与猪带绦虫卵镜下差别不大）
（三）曼氏迭宫绦虫
曼氏迭宫绦虫成虫寄生于猫、犬等终宿主的小肠内，其幼虫（裂头蚴）阶段可侵犯人体并在人体组织内寄生。人感染常因外用或生食含有裂头蚴的蝌蚪、蛙肉或蛇肉而引起，也可因饮生水食入了含有原尾蚴的剑水蚤而感染。
实验诊断需在皮下包块或其他组织中活检到裂头蚴作为诊断依据。但对深部组织寄生的裂头蚴，免疫学检查具有重要的辅助诊断价值。常用裂头蚴抗原作皮内试验或酶联免疫试验可获满意结果。
1．成虫（观察浸制标本） 肉眼观察外部特点为白色带状，长约60～l00cm，头节细小呈指状，背腹面各有一纵行的吸槽。颈部细长，链体节片约1000个，节片的宽度大于长度，但远端节片长宽几近相等。成节与孕节结构基本相似，可见到每个节片中部凸起的子宫。
2．裂头蚴（观察染色标本） 放大镜观察，虫体呈条带状，长约10～30cm，体前端稍大，具有与成虫相似的头节，虫体不分节，但具横皱纹。
3．裂头蚴（观察浸制标本） 从青蛙解剖获取。裂头蚴在蛙肉内成团或条形状态。
4．虫卵（观察玻片标本） 呈椭圆形，浅灰褐色，两端稍尖，大小约为53～76µm ×31～44µm，卵壳较薄，一端有卵盖，内有一个卵细胞和若干个卵黄细胞。
5．曼氏迭宫绦虫成节 子宫位于节片中部，作3-4个螺旋状盘曲，节片腹面正中线依次有雄生殖孔、雌生殖孔和子宫孔。睾丸呈小圆球形，约320-540个，散布在整个节片中。
（四）溶组织内阿米巴
有多种阿米巴在人体消化道中寄生，其中只有痢疾阿米巴可致病，在其他非致病阿米巴中，以结肠阿米巴为最常见，因这两种阿米巴虫体形态结构相似，应注意鉴别。溶组织内阿米巴的四核包囊具感染性，进入人体后分别以肠腔型滋养体(不致病)和组织型滋养体(致病)两种形态存在。
1．溶组织内阿米巴滋养体（自学铁苏木素染色标本） 呈不规则的圆形或椭圆形。大小在10～60µm之间。在高倍镜下见到体积较大、外缘透明有不规则的伪足、内为颗粒而具有黑色细胞核的物体，这些物体很可能就是痢疾阿米巴滋养体。然后将其移向视野中心，并在载玻片上滴加镜油一滴，转换油镜检查。此时只可用细螺旋纠正焦距，切不可用粗螺旋，否则将会损坏镜头或标本。看到清晰的滋养体后，应注意观察：①外质无色透明，常显示有伪足；②内质为蓝黑色的颗粒状，其食物泡中含有完整或半消化的圆形墨黑色的红细胞，此点为组织型滋养体的主要特征；③核圆形，有薄而染黑色的核膜，核内缘可见分布较均匀的或聚在一边呈镰刀形的染色质粒；④核仁小，亦染黑色，位于核中央。
2．溶组织内阿米巴包囊（自学铁苏木素染色标本）在高倍镜下见到黄色或蓝黑色的圆形物体，内隐约看到1到多个白色空泡或小圆圈，这些物体很可能就是溶组织内阿米巴包囊。然后将其移向视野中心，并在载玻片上滴加镜油一滴，转换油镜检查。
圆形，直径10～16µm，囊壁常透明无色，囊内可见1～4泡状核，核的构造同滋养体。拟染色体为深黑色，棒状，两端钝圆，在成熟的四核包囊拟染色体消失。有些包囊内可见1到多个圆形空泡状的糖原泡。
3．结肠内阿米巴包囊（可能与溶组织内阿米巴包囊混合保存，应注意鉴别） 一般较大，圆形，直径大约为10～20µm，核的数目为1～8个，成熟包囊为8个核，如看到拟染色体时则呈草束状。
4．病人大肠壁溃疡病理标本及病理切片标本 其特点表现为结肠黏膜面有大小不一的溃疡，溃疡之间黏膜正常。
5．阿米巴肝脓肿病理标本 脓肿大的，可有明显的脓肿壁，为纤维组织所形成，脓腔内有未被溶解的结缔组织，形成肝组织支持架，呈带状贯通脓腔中间。
（五）蓝氏贾第鞭毛虫
蓝氏贾第鞭毛虫有滋养体和包囊两个阶段，滋养体寄生于十二指肠和胆囊内；滋养体落人肠腔，随肠内容物下行至回肠下段及结肠形成包囊，再随大便排出；人感染是吞食含有四核包囊的食物和水而引起。
本虫的实验室检查：取粪便生理盐水直接涂片法，在水样稀便中查滋养体，在成形粪便作碘染色查包囊；作十二指肠液引流直接涂片或离心后取沉渣涂片查滋养体。
1．滋养体（观察铁苏木素染色玻片标本） 虫体大小为9～21µm×5～15µm×2～4µm。油镜下观察滋养体呈梨形，前端宽，向后渐尖细，体前端有一对卵圆形的泡状细胞核，核的中央有显著的核仁，轴柱纵贯虫体，把虫体分为左右对称的两部分。沿轴柱发出4对鞭毛，即前鞭毛、中鞭毛、腹鞭毛和后鞭毛各一对。有时在轴柱中部可见一对逗点状或半月形的付基体。
2．包囊（观察悬液涂片标本或铁苏木素染色玻片标本） 染色标本呈长卵圆形，大小为（8～14）µm×（7～10）µm，外被囊壁，囊内有4个细胞核，核的位置偏于一端，轴柱在虫体中央，有时还可以见到黑色的丝状体和弯形的付基体。
（六）阴道毛滴虫
阴道毛滴虫生活史简单，仅有滋养体阶段，主要通过直接（性接触方式）或间接（接触被阴道毛滴虫污染的内裤、毛巾等物的方式）传播。本虫主要寄生于女性生殖泌尿道，亦可寄生于男性尿道和前列腺内。
本虫的实验室检查，对女性取阴道分泌物作生理盐水直接涂片法，应快送快检；对男性取尿液或前列腺液作离心沉淀取沉渣涂片镜检或培养。
1. 观察阴道毛滴虫吉氏染色标本 虫体梨形，体长7～23µm，前端有4根鞭毛，另有1根鞭毛在虫体的一侧作波浪式的延伸，并以菲薄的膜与细胞质相连形成波动膜。大而明显的细胞核呈椭圆形。位于虫体前1/3处，染成紫红色，轴柱从体前到后纵贯虫体，并伸于体后。
2. 观察阴道毛滴虫活标本 自滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物或经人工培养（保持在25℃～30℃)而获得标本。实验时吸出培养液一滴置于载玻片上，盖上盖玻片，先在低倍镜下找到呈转圈运动方式的虫体后，再转到高倍镜下观察。因虫体活动性大，不易详细察，。虫体为梨形，作螺旋式向前转动。缩小光圈，以观察4根摆动的鞭毛和虫体腹面弯曲而颤动的波动膜，有时还能在虫体前端见到椭圆形的核和空泡。体后有伸出体外的轴柱。在阴道分泌物的涂片中，还能找到大而多角形的阴道上皮细胞、小而圆的白细胞以及聚集成堆的脓细胞等，应予以鉴别。
（七）弓形虫
1．滋养体形态观察（油镜下观察玻片标本） 香蕉形或半月形，一端较尖，一端钝圆；长4～7µm，吉氏染色可见一红色的核，位于虫体中央，核仁较大，细胞浆呈淡蓝色。
2．假包囊（油镜下观察） 宿主细胞膜包围形成的速殖子虫团，没有真正的囊壁。
3．包囊 圆形或椭圆形，直径5～100µm，外有一层富有弹性的囊壁，内含数个至数百个形态与速殖子相似的缓殖子。
二、大学生口腔原虫检查
在洁净的载玻片中央滴加1－2滴生理盐水，用牙签于口腔的磨牙舌侧刮取小量的牙垢，置于生理盐水中涂抹均匀，加上盖玻片，直接用高倍镜镜检。
1.口腔毛滴虫
活虫体形变化较大，染色后呈椭圆形或梨形，体长为6.5～7.5µm，前鞭毛4根，后
鞭毛无游离的末端，波动膜略长于阴道毛滴虫，核1个，位于前部中央，卵圆形，核内可见较多染色较深的染色质。轴柱纤细并纵贯全虫，末端伸出体外。直接涂片中可见无色滋养体运动活泼，鞭毛和波动膜摆动活跃。
2.齿龈内阿米巴
齿龈内阿米巴仅有滋养体期，滋养体直径10～20mm，无固定形态，可定向伸出伪
足，伪足内外质分明，活动迅速；食物泡常含细菌、白细胞，偶有红细胞，胞核的核仁居中而明显，有核周染色质粒
【实验报告】
一、绘图：1．带绦虫卵 2．猪带绦虫和牛带绦虫孕节
二、口腔原虫检查实验报告
